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上海邦景實業(yè)有限公司
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其它類細(xì)胞原理與步驟
2020-11-4 閱讀(280)
其它類細(xì)胞原理：
當(dāng)兩性分子分散于水相時,分子的疏水尾部傾向于聚集在一起,避開水相,而親水頭部暴露在水相,形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊泡,稱為脂質(zhì)體.脂質(zhì)體在超分子化學(xué)及藥學(xué)等多個學(xué)科領(lǐng)域得到了非常廣泛的應(yīng)用.由于脂質(zhì)體在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與生物細(xì)胞膜相似,常用作人工細(xì)胞膜,以模擬細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo),研究物質(zhì)的跨膜運(yùn)送機(jī)理以及構(gòu)建仿生分子器件等。
其它類細(xì)胞具體步驟：
一、細(xì)胞復(fù)蘇
將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進(jìn)其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
二、細(xì)胞傳代
細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM*培養(yǎng)基終止消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進(jìn)行計數(shù)，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
三、細(xì)胞凍存
細(xì)胞密度達(dá)到80%～90%時，去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM*其它類細(xì)胞基終止消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮，可以保存三個月。
其它類細(xì)胞操作注意：
1.不同的試劑盒因工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用人ELISA試劑盒說明書嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.
2.若不同批號其它類細(xì)胞的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3.反應(yīng)時間的誤差，做大量標(biāo)本時，一孔和后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
4.臨界值附近標(biāo)本波動為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對閾值附近的標(biāo)本影響，建議校對加樣器。
