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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
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病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟
2021-6-17 閱讀(403)
病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1、血液制備: 檸檬酸 (Citric Acide)或 肝素 抗凝取血1～2ml,分裝入管中,每管0.5ml全血,置于4℃冰箱中30分鐘.
2、EBV病毒轉(zhuǎn)化:從液氮中取出凍存的0.5ml全血,在37℃水中迅速解凍.
3、將解凍細(xì)胞與10ml不含血清的RPMI 1640混合,2500 rpm離心2分鐘,棄上清,用含20％的胎牛血清、青、和的RPMI 1640生長培養(yǎng)基重懸細(xì)胞.
4、加入0.3～0.5ml的EBV病毒液,37℃水浴30分鐘～2小時,并不時搖動,以免出現(xiàn)凝塊.
5、分裝入50ml的培養(yǎng)瓶中,同時補(bǔ)加適量培養(yǎng)液,置入含5％CO2溫箱中,100％溫度下培養(yǎng).
6、一周后加補(bǔ)入2ml 培養(yǎng)基 .
7、經(jīng)常鏡檢培養(yǎng)物,每3～4天加液或換液,隨細(xì)胞數(shù)量增多,可分裝入大瓶中培養(yǎng).
