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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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產(chǎn)品簡介

玻璃珠法柱式真菌DNAout真菌DNA提取是一個(gè)難題,一是因?yàn)檎婢芯z體、孢子等多種*不同的結(jié)構(gòu)形態(tài),二是因?yàn)槠浼?xì)胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品,它利用 法破碎細(xì)胞,主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細(xì)胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細(xì)胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即

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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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玻璃珠法柱式真菌DNAout

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真菌DNA提取是一個(gè)難題,一是因?yàn)檎婢芯z體、孢子等多種*不同的結(jié)構(gòu)形態(tài),二是因?yàn)槠浼?xì)胞壁一般都很厚,比較難以破碎。本產(chǎn)品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹產(chǎn)品,它利用 法破碎細(xì)胞,主要用于從真菌孢子和液體培養(yǎng)的真菌細(xì)胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAOUT采用液氮研磨法破碎細(xì)胞,適用于從真菌菌絲體中提取其基因組DNA)。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,提供包括玻璃珠、離心吸附柱在內(nèi)的所有試劑和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎細(xì)胞,屬于物理方法,遠(yuǎn)比基于蝸牛酶或破壁酶的溫和化學(xué)破壁法重復(fù)性好,也不容易帶入外源真菌DNA(注:文獻(xiàn)報(bào)道蝸牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往會(huì)造成污染)。
3. 本方法提取一個(gè)樣品只需要10余分鐘,方便、快速和高效。
4. 一次可以處理5 mL的過夜真菌培養(yǎng)物,所得的基因組DNA OD260/OD280一般都在1.8左右,長度一般在20 Kb左右,每mL菌液的DNA產(chǎn)率一般在1-3 μg??梢灾苯佑糜赑CR和酶切等后續(xù)試驗(yàn)。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
相關(guān)產(chǎn)品列表:
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH5.5 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.5 
Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH7.0 
Manganese Chloride Solution(化錳溶液),1M 
Manganese Sulfate Solution(硫酸錳溶液),0.5M 
Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5 


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