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電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液溴酚藍(lán)分子式為C19H10Br4O5S，分子量為669.97，CAS號(hào)為115-39-9。易溶于氫氧化鈉溶液，溶于甲醇、乙醇和苯酚，是一種pH 指示劑，在pH 3.0 （黃）~4.6（藍(lán)紫）范圍，顏色由黃變藍(lán)。本產(chǎn)是溴酚藍(lán)的1%水溶液，用作制備常用做電泳指示染料，其泳動(dòng)率在0.5-1.4%瓊脂糖中，相當(dāng)于300 bp dsDNA，在8% PAGE變性膠中相當(dāng)于20 bp dsDNA
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
電泳級(jí)溴酚藍(lán)溶液 | 10mL | 120元 |
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溴酚藍(lán)分子式為C19H10Br4O5S，分子量為669.97，CAS號(hào)為115-39-9。易溶于氫氧化鈉溶液，溶于甲醇、乙醇和苯酚，是一種pH 指示劑，在pH 3.0 （黃）~4.6（藍(lán)紫）范圍，顏色由黃變藍(lán)。本產(chǎn)是溴酚藍(lán)的1%水溶液，用作制備常用做電泳指示染料，其泳動(dòng)率在0.5-1.4%瓊脂糖中，相當(dāng)于300 bp dsDNA，在8% PAGE變性膠中相當(dāng)于20 bp dsDNA。如果含溴酚藍(lán)的上樣液跟樣品混合后變黃，則表示樣品中酸性物質(zhì)沒去除干凈，必須用1M Tris pH8.8調(diào)到溴酚藍(lán)呈藍(lán)色，否則蛋白將向相反方向移動(dòng)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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