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通用型RT-LAMP試劑盒

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更新時間：2018-06-13 15:06:12瀏覽次數(shù)：239次

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產品簡介

通用型RT-LAMP試劑盒本產本試劑盒可以用于RT-LAMP等溫擴增，RT-LAMP即逆轉錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增）的結合，專門用于快速擴增RNA。LAMP是2000年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴增方法。它利用4或6條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的DNA 聚合酶，在等溫條件下（63℃左右） 30－60分鐘完成擴增。該技術

詳細介紹

通用型RT-LAMP試劑盒

名稱	規(guī)格	價格	手冊
通用型RT-LAMP試劑盒	50次	詢價

本產本試劑盒可以用于RT-LAMP等溫擴增，RT-LAMP即逆轉錄和Loop-Mediated Isothermal Amplification（環(huán)介導等溫擴增）的結合，專門用于快速擴增RNA。LAMP是2000年才出現(xiàn)的一種新穎的等溫核酸擴增方法。它利用4或6條模板專一的特異引物和具有鏈置換能力的DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60分鐘完成擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優(yōu)于RT-PCR技術，同時還不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過程，不依賴任何專門的儀器設備。目前已成功應用于人類及動植物、細菌、病毒、寄生蟲、真菌等病原體的快速檢測。本試劑盒具有下列特點：

1.高特異性，由于同時使用4-6條特異引物，所以特異性比RT-PCR更高。

2.高擴增效率，擴增效率可達到10E9-10E10，比PCR靈敏一個數(shù)量級，可檢測到單拷貝的RNA分子。

3.65℃左右完成RT和LAMP擴增，不需要貴重的熱循環(huán)儀。

4.即開即用，包含了除引物和模板RNA外的所有成份，十分方便。

5.肉眼檢測擴增結果，不需要昂貴的電泳、熒光PCR等儀器。

6.提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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