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DNA去磷酸化試劑盒

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DNA去磷酸化試劑盒分子克隆時(shí)，載體的自連極大降低了連接效率，而對(duì)載體DNA兩個(gè)5′端的-PO4基團(tuán)進(jìn)行去磷酸化處理可以抑制自連反應(yīng)。此外在進(jìn)行DNA或RNA5′端標(biāo)記前，也需要將其本來的-PO4基團(tuán)去除再加上標(biāo)記基團(tuán)。本公司開發(fā)的DNA去磷酸化產(chǎn)品就是針對(duì)這一目的而開發(fā)。它具有下列特點(diǎn)：
1. 基于細(xì)菌堿性磷酸酶，反應(yīng)在較高溫度進(jìn)行，效率更高。

詳細(xì)介紹

DNA去磷酸化試劑盒

名稱	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
DNA去磷酸化試劑盒	20次	590元

分子克隆時(shí)，載體的自連極大降低了連接效率，而對(duì)載體DNA兩個(gè)5′端的-PO4基團(tuán)進(jìn)行去磷酸化處理可以抑制自連反應(yīng)。此外在進(jìn)行DNA或RNA5′端標(biāo)記前，也需要將其本來的-PO4基團(tuán)去除再加上標(biāo)記基團(tuán)。本公司開發(fā)的DNA去磷酸化產(chǎn)品就是針對(duì)這一目的而開發(fā)。它具有下列特點(diǎn)：

1. 基于細(xì)菌堿性磷酸酶，反應(yīng)在較高溫度進(jìn)行，效率更高。

2. 把DNA和RNA 5′端的-PO4基團(tuán)變成-OH基團(tuán)，喪失連接能力。

3. 模板可以是單鏈，也可以是雙鏈，既可以是DNA，也可以是RNA。

4. 處理后的核酸純化后可以直接用于連接反應(yīng)和標(biāo)記反應(yīng)。

5. 本產(chǎn)品足夠20次去磷酸化實(shí)驗(yàn)。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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