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即用型藍(lán)白T載體B型（T7-T3,有MCS）

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

即用型藍(lán)白T載體B型（T7-T3,有MCS）本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個(gè)末端的5'都有一個(gè)突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴(kuò)增得到的PCR片段。
1. 由于是通過(guò)酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠(yuǎn)高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉(zhuǎn)移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

詳細(xì)介紹

即用型藍(lán)白T載體B型（T7-T3,有MCS）

名稱(chēng)	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
即用型藍(lán)白T載體B型（T7-T3,有MCS）	20次	詢價(jià)

本產(chǎn)品是用XcmI酶切線性化的DNA片段，其兩個(gè)末端的5'都有一個(gè)突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶（如Taq DNA聚合酶）擴(kuò)增得到的PCR片段。

1. 由于是通過(guò)酶切制備，所以載體兩端的帶T率為100%，遠(yuǎn)高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉(zhuǎn)移酶在平末端載體加尾得到的T載體。

2. 克隆的陽(yáng)性率一般在90%以上，縮短了篩選過(guò)程。

3. 插入位點(diǎn)兩側(cè)有對(duì)稱(chēng)的EcoRI酶切位點(diǎn)，便于對(duì)克隆的PCR片段進(jìn)行近一步的分析。

4. 來(lái)源于pBlueScript ⅡSK（+），故克隆位點(diǎn)兩側(cè)分別有T7和T3 RNA聚合酶啟動(dòng)子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。

5. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測(cè)序引物測(cè)定插入片段的序列。

6. T克隆位點(diǎn)位于β-半乳糖苷酶的α 肽編碼區(qū)內(nèi)，可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選。

7. 含有絲狀噬菌體f1 復(fù)制起始子，可以制備單鏈DNA。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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