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一站式TA克隆試劑盒（含感受態(tài)）

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更新時間：2018-06-14 13:43:45瀏覽次數(shù)：265次

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產(chǎn)品簡介

一站式TA克隆試劑盒（含感受態(tài)）AT克隆就是利用T載體兩個3'端各帶有一個T突出，而PCR擴增產(chǎn)物兩個3'端各帶有一個A突出的特點，在DNA連接酶的作用下，將PCR產(chǎn)物克隆到T載體中的過程，它是克隆PCR擴增產(chǎn)物的主要手段。本產(chǎn)品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特點：
1. 一站式，用戶只需要準備PCR產(chǎn)物即可進行AT克隆。

詳細介紹

一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài))

名稱	規(guī)格	價格	手冊
一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài))	20次	詢價

AT克隆就是利用T載體兩個3'端各帶有一個T突出，而PCR擴增產(chǎn)物兩個3'端各帶有一個A突出的特點，在DNA連接酶的作用下，將PCR產(chǎn)物克隆到T載體中的過程，它是克隆PCR擴增產(chǎn)物的主要手段。本產(chǎn)品提供了完成AT克隆的所有成份，具有下列特點：

1. 一站式，用戶只需要準備一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài))PCR產(chǎn)物即可進行AT克隆。

2. T載體由XcmI酶切方法制備，兩個5'端100%含T突出，自連率幾乎為零。

3. 克隆效率高，一次AT克隆實驗一般能得到上百個重組子。

4. 陽性率高，一般能到90%以上，大大縮短了篩選工作。

5. 提供供兩次實驗用的對照插入片段，方便分析實驗數(shù)據(jù)。

6. 插入位點兩側(cè)有對稱的常見酶切位點（如BstZI、EcoRI、NotI），便于對克隆的PCR片段進行近一步的分析。

7. 克隆位點兩側(cè)分別有T7和SP6 RNA聚合酶啟動子，便于用克隆的PCR片段制備RNA探針。

8. 可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。

9. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α-肽編碼區(qū)內(nèi)，可以進行藍白斑篩選。

10. 含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài))離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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