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更新時(shí)間：2018-06-19 12:37:42瀏覽次數(shù)：328次
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尼龍膜，13×20 cm尼龍膜可用于蛋白和核酸的轉(zhuǎn)換。尼龍膜比硝酸纖維素膜容易操作，與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-去污劑混合物有很高的結(jié)合能力。它靈敏度高，但背景也高，與陰離子染料（如考馬斯亮藍(lán)和氨基黑）有較強(qiáng)的結(jié)合能力，所以不能用陰離子染料在帶正電的尼龍膜上蛋白質(zhì)染色。帶正電的尼龍膜還能有效結(jié)合低濃度的小分子蛋白質(zhì)、酸性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖。但當(dāng)轉(zhuǎn)移緩沖液中存在SDS時(shí)會(huì)造成蛋白質(zhì)的泄漏，用甲醛可以提高蛋
尼龍膜，13×20 cm
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
尼龍膜，13×20 cm | 1張 | 詢價(jià) |
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尼龍膜可用于蛋白和核酸的轉(zhuǎn)換。尼龍膜比硝酸纖維素膜容易操作，與蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)-去污劑混合物有很高的結(jié)合能力。它靈敏度高，但背景也高，與陰離子染料（如考馬斯亮藍(lán)和氨基黑）有較強(qiáng)的結(jié)合能力，所以不能用陰離子染料在帶正尼龍膜，13×20 cm電的尼龍膜上蛋白質(zhì)染色。帶正電的尼龍膜還能有效結(jié)合低濃度的小分子蛋白質(zhì)、酸性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖。但當(dāng)轉(zhuǎn)移緩沖液中存在SDS時(shí)會(huì)造成蛋白質(zhì)的泄漏，用甲醛可以提高蛋白質(zhì)在尼龍膜上的保留指數(shù)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，尼龍膜，13×20 cm離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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