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所 在 地上海市
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更新時(shí)間：2018-06-20 14:17:05瀏覽次數(shù)：569次
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Taq DNA聚合酶在90℃以上幾乎無DNA合成，在75～80℃時(shí)延伸率約150個(gè)核苷酸/秒，70℃時(shí)為60個(gè)核苷酸/秒，55℃時(shí)為24個(gè)核苷酸/秒。在65-68℃并有Mn2+存在時(shí)還具有逆轉(zhuǎn)錄活性。
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊 |
Taq DNA聚合酶 | 500 U | 1198元 |
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本產(chǎn)品是Thermus aquaticus（水生棲熱菌）的DNA聚合酶基因在E. coli中表達(dá)而得，具有以雙鏈DNA為模板的5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性。Taq DNA聚合酶長為832個(gè)氨基酸，分子量為 94 Kd。該酶可以廣泛用于PCR、RT-PCR和加尾反應(yīng)等。其特點(diǎn)如下：
1. 具耐熱DNA聚合活性。該酶在90℃以上幾乎無DNA合成，在75～80℃時(shí)延伸率約150個(gè)核苷酸/秒，70℃時(shí)為60個(gè)核苷酸/秒，55℃時(shí)為24個(gè)核苷酸/秒。在65-68℃并有Mn2+存在時(shí)還具有逆轉(zhuǎn)錄活性。
2. 熱穩(wěn)定。在PCR混合物中95℃保溫40 分鐘仍可保持50%的活性。
3. Mg2+離子依賴性。MgCl2濃度在2.0 mM時(shí)該酶催化活性。
4. 本酶無3'→5'外切活性，不具3'→5'校對功能，堿基錯(cuò)配機(jī)率為2.1×10-4。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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