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重組蛋白的常見(jiàn)問(wèn)題匯總

閱讀：139發(fā)布時(shí)間：2022-11-4

1.蛋白為什么要凍干？?jī)龈蓪?duì)蛋白的影響有哪些？

蛋白質(zhì)對(duì)熱敏感，凍干能使絕大部分蛋白質(zhì)的活性保留下來(lái)，提高蛋白的穩(wěn)定性并延長(zhǎng)保存時(shí)間，同時(shí)降低運(yùn)費(fèi)。

2.凍干前為什么向蛋白溶液中加保護(hù)劑？一般凍干保護(hù)劑有哪幾種？

保護(hù)劑是用來(lái)在凍干和儲(chǔ)存過(guò)程中保護(hù)蛋白的。常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過(guò)程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集

溫馨提示：對(duì)于大多數(shù)蛋白，重懸后在4℃僅能短期保存(約1周)。如想長(zhǎng)期保存，請(qǐng)先配制成稀釋液(其中必須含有載體蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分裝凍存于-20℃或-80℃。一定要避免反復(fù)凍融，因每次凍融均會(huì)引起蛋白的部分失活。

3.如何重構(gòu)凍干粉？

請(qǐng)查看您的貨物隨附的分析證書(shū)以獲取有關(guān)重構(gòu)的確切說(shuō)明，因?yàn)椴⒎撬挟a(chǎn)品都在相同條件下重構(gòu)。一般來(lái)說(shuō)，我們建議使用無(wú)菌水進(jìn)行復(fù)溶。將推薦體積的無(wú)菌水加入小瓶中，輕輕搖晃以溶解蛋白質(zhì)。不要渦旋。

4.為什么我的管內(nèi)幾乎看不見(jiàn)蛋白產(chǎn)品？

蛋白產(chǎn)品中不含載體蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并以較低含鹽量的溶液進(jìn)行凍干時(shí)，常常不能形成白色網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，而是微量的蛋白在凍干過(guò)程中沉積在管內(nèi)，形成很薄或肉眼不可見(jiàn)的透明蛋白層。

5.應(yīng)如何確定細(xì)胞因子的種屬交叉活性？

1) 除少數(shù)例外，大多數(shù)人類細(xì)胞因子對(duì)小鼠細(xì)胞均有活性。2) 許多小鼠細(xì)胞因子也可作用于人類細(xì)胞，但比活性可能低于對(duì)應(yīng)的人類細(xì)胞因子。 3) IL-7等為數(shù)不多的人類細(xì)胞因子作用于小鼠細(xì)胞時(shí)比對(duì)應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子活性更強(qiáng)。4) 干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細(xì)胞因子種屬特異，對(duì)非同源細(xì)胞幾乎沒(méi)有活性。5) 相反，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGFs)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素(neurotrophins)高度保守，在不同動(dòng)物種屬細(xì)胞上均具有很好的活性。

6.什么是載體蛋白？

載體蛋白如 HSA 或 BSA 用于提高重組蛋白的穩(wěn)定性，并有助于避免產(chǎn)品粘在小瓶壁上。

7.我應(yīng)該如何儲(chǔ)存重組蛋白？

對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，蛋白質(zhì)溶液應(yīng)與載體蛋白（例如 0.1% BSA 或 0.1% HSA）分裝保存，并在 -20°C 下冷凍保存。請(qǐng)記住，每個(gè)冷凍/解凍循環(huán)都可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。除非分析證書(shū)上另有說(shuō)明，否則大多數(shù)重組蛋白的保質(zhì)期為一年。如果將它們保存在分析證書(shū)上所述的存儲(chǔ)條件下，則提供此保證。

8.如何確定重組蛋白的數(shù)量？為什么我的檢測(cè)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)數(shù)量與您的結(jié)果不同？

我們通過(guò)BCA、SDS-PAGE、HPLC等方法確定重組蛋白的數(shù)量。不同的測(cè)定產(chǎn)生不同的量化結(jié)果。有時(shí)，如果您進(jìn)行不同的檢測(cè)，差異可能會(huì)很大。蛋白質(zhì)也有可能在儲(chǔ)存過(guò)程中形成聚集體，在重組和離心后導(dǎo)致?lián)p失。我們對(duì)每批產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制測(cè)試，但是，同一批次中的一些小瓶可能與其他小瓶不同（這種情況很少發(fā)生）。

9.如何區(qū)分重組蛋白、融合蛋白和天然蛋白

重組蛋白是利用基因工程技術(shù)產(chǎn)生的，通常是由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳腺產(chǎn)生，其作為生物制藥在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中作用顯著。利用基因工程技術(shù)，可以使哺乳動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠"。方法：是將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，通過(guò)顯微注射等方法，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物（哺乳動(dòng)物才會(huì)泌乳）的受精卵中，然后，將受精卵送入母體內(nèi)，使其生長(zhǎng)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)所需要的蛋白質(zhì)藥品，因而稱為動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器。

融合蛋白又稱為“標(biāo)簽蛋白"，常用的標(biāo)簽有His、GST、Strep標(biāo)簽。融合蛋白是通過(guò)DNA重組技術(shù)將要表達(dá)的目的蛋白基因和表達(dá)載體上融合蛋白基因相連，通過(guò)這種方式表達(dá)出來(lái)的蛋白質(zhì)，就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重組蛋白。融合蛋白表達(dá)是重組蛋白表達(dá)的一種策略，融合表達(dá)是一種方法。

天然蛋白質(zhì)是在自然界中存在的，不經(jīng)過(guò)人工的任何修飾或加工，比如大豆中的蛋白質(zhì)和病毒表面的蛋白質(zhì)。

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