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培養(yǎng)基分裝滅菌操作方法和注意事項(xiàng)

閱讀:79發(fā)布時(shí)間:2023-5-6

  培養(yǎng)基分裝是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同,加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同,所以培養(yǎng)基的種類(lèi)很多,使用的原料也各有差異,但從營(yíng)養(yǎng)角度分析,培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。另外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。瓊脂是從石花菜等海藻中提取的膠體物質(zhì),是應(yīng)用廣的凝固劑。加瓊脂制成的培養(yǎng)基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反復(fù)融化,其凝固性降低。任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)滅菌,以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。
 
  培養(yǎng)基分裝滅菌操作方法和注意事項(xiàng):
 
  加水:打開(kāi)滅菌鍋蓋,向鍋內(nèi)加水到水位線(xiàn)。立式消毒鍋用已煮開(kāi)過(guò)的水,以便減少水垢在鍋內(nèi)的積存。注意水要加夠,防止滅菌過(guò)程中干鍋。
 
  裝料、加蓋:滅菌材料放好后,關(guān)閉滅菌器蓋,采用對(duì)角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋,使蒸汽鍋密閉,勿使漏氣。
 
  排氣:打開(kāi)排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱,待水煮沸后,水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出,當(dāng)有大量蒸汽排出時(shí),維持5min,使鍋內(nèi)冷空氣排凈。
 
  升壓、保壓和降壓:當(dāng)鍋內(nèi)冷空氣排凈時(shí),即可關(guān)閉排氣閥,壓力開(kāi)始上升。當(dāng)壓力上升至所需壓力時(shí),控制電壓以維持恒溫,并開(kāi)始計(jì)算滅菌時(shí)間,待時(shí)間達(dá)到要求(一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃,20min)后,停止加熱,待壓力降至接近“0”時(shí),打開(kāi)放氣閥。注意不能過(guò)早過(guò)急地排氣,否則會(huì)由于瓶?jī)?nèi)壓力下降的速度比鍋內(nèi)慢而造成瓶?jī)?nèi)液體沖出容器之外。
 
  滅菌后的培養(yǎng)基空白培養(yǎng):滅菌后的培養(yǎng)基放于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),經(jīng)24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng),可保存?zhèn)溆?;斜面培養(yǎng)基取出后,立即擺成斜面后空白培養(yǎng);半固體的培養(yǎng)基垂直放置凝成半固體深層瓊脂后,空白培養(yǎng)。

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