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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
2023-5-19 閱讀(76)
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
皮膚組織蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種動(dòng)物皮膚組織樣品中提取蛋白。
本試劑盒含有的配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。
本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。
本試劑盒提取的蛋白為不具有天然蛋白構(gòu)象的非活性蛋白。
本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。
本試劑盒提取的蛋白樣本
二、產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至 30分鐘-1小時(shí)。
2.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。
4.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含
6.種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲蛋白酶、半胱蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書產(chǎn)品組成：
名稱規(guī)格 | 50T | 100T |
蛋白提取液 A | 25 ml | 50 ml |
蛋白酶抑制劑混合物 B | 100 ul | 200 μl |
注意：蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。 | ||
四、自備材料：
1、離心機(jī)，振蕩器，勻漿機(jī)/勻漿器，渦旋混勻器，移液器，冰箱
2、PBS緩沖液 ，蛋白定量試劑盒
3、離心管，吸頭，一次性手套
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
五、操作步驟(僅供參考)：
1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。
4. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。5. 如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
6.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
1)提取液準(zhǔn)備：每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物B和2ul蛋白酶抑制劑混合物C，混勻后置冰上備用。
2）取100-200mg皮膚組織樣本，用PBS洗干凈，然后用手術(shù)剪刀盡可能剪碎，加入500ul蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3）將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩30-40分鐘。
4）在4℃，10000-14000×g 條件下離心15分鐘。
5）將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到皮膚組織蛋白。
6）將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
六、注意事項(xiàng)：
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長(zhǎng)試劑 A 的處理時(shí)間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。皮膚組織蛋白質(zhì)含量較低，適當(dāng)加大組織上樣量。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford 法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾 Bradford 法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。
3、正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。
4、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底， 避免開蓋時(shí)試劑損失。
5、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。
6、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
7、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并清除殘留清潔劑。
8、實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
七、有效期：2-8 ℃避光有效期為一年
皮膚組織蛋白提取試劑盒說明書
