 |
上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
聯(lián)系電話
15821073967
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 高杰
- 電話：
- 021-34661276
- 手機：
- 15821073967
- 售后電話：
- 15301693058
- 傳真：
- 021-34661275
- 地址：
- 上海市閔行區(qū)元江路5500號第一幢5658室
- 郵編：
- 網(wǎng)址：
- www.yajimall.com
原代細胞培養(yǎng)體系配置方法
2019-5-22 閱讀(3206)
原代細胞培養(yǎng)體系配置方法
原代培養(yǎng)體系一般由以下四種（三種）組成：
名稱 | 體積 | 保存條件 |
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 500ml | 4℃、避光 |
添加劑 | 5ml | -20℃、避光 |
胎牛血清（FBS） | 0-50ml | -20℃、避光 |
雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S） | 5ml | -20℃、避光 |
添加劑和雙抗通常濃度為100X（100倍工作濃度）。
血清的添加比例有0%（不添加），0.5%（2ml），2.5%（10ml），5%（25ml），10%（50ml）幾種。
次使用時先將-20℃保存的添加劑、雙抗、FBS轉(zhuǎn)移到4℃溶解后，在滅菌后的百級潔凈等級環(huán)境中操作，所使用的容器和移液耗材均需要進行過無菌處理。
首先將解凍的FBS、添加劑和雙抗進行分裝，平均分裝成5-10份，留下本次配制所需要的量，剩余的繼續(xù)放回-20℃保存，之后按需取用融化后配制*培養(yǎng)基，避免反復(fù)凍融。
建議用無菌的50ml離心管盛裝配置好的*培養(yǎng)基。
原代細胞培養(yǎng)體系配置方法配制方法：在每個50ml離心管中加入①500ul添加劑、②500ul雙抗、③50×血清百分比ml的胎牛血清、④（50×（1-血清百分比）-1）ml的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。配制完成后蓋上蓋子，顛倒混勻備用。
配置好的培養(yǎng)基置于4℃避光保存。由于添加劑中有很多重組蛋白，易發(fā)生降解，故配置好的*培養(yǎng)基有效期僅為3-4周，請盡快使用。因此建議每次配制1-2管（50-100ml），當(dāng)然使用量大的情況下也可以適量增加配置量。
- S.：不建議客戶將全部的血清、雙抗、添加劑直接加入基礎(chǔ)培養(yǎng)中混勻使用，原因如下：
1.500ml的基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積較大，灌裝時體積波動很大，直接加入，無法準(zhǔn)確地控制因子和血清的工作濃度。
- 配制好的培養(yǎng)基僅能在4℃保存3-4周，如果期間沒用完，繼續(xù)使用會影響培養(yǎng)效果。如果是-20℃保存，可以延長保存時間，但是反復(fù)凍融也會影響*培養(yǎng)基的效果。
- 如果使用培養(yǎng)基時由于操作失誤導(dǎo)致污染，分裝能減少培養(yǎng)基的損失量。
- 原代細胞培養(yǎng)體系配置方法
