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產(chǎn)品及特點 小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus，MHV)會引起小鼠肝炎，但在正常情
況下大多呈不顯性感染，只在應(yīng)激因素激發(fā)下才能成為致死性疾病，主要為肝炎
和腦炎。老齡小鼠感染后會出現(xiàn)腹水，乳鼠，或在球狀附紅細胞體參與下感染的
成年小鼠，肝呈黃色或褐色，并有出血斑點；腎腫脹而蒼白。小鼠肝炎病毒，無
論在體內(nèi)外，均易建立持續(xù)感染，帶毒小鼠分布于*，感染范圍廣，影響力
大，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研
領(lǐng)域快速定量檢測小鼠肝炎病毒。它具有下列特點。它具有下列特點：
1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)小鼠肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間
轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分 成 份 編號 十孔盒包裝
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer 91202a 200 μL（橙色蓋）
MMLV-Taq Mix 91202b 75 μL（紅蓋）
超純水 100935 1 mL（藍蓋）
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 13-54100yw 100 μL（白蓋）
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照
（1×10E8 拷貝/μL）
13-54100pc 50 μL（黃蓋）
天凈沙核酸釋放劑（試用裝） 61202a 20 次（1mL，綠蓋）
使用手冊 13-54100sc 1 份
注：為避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供小鼠肝
炎病毒專一的 DNA 片段作為陽性對照。
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分
分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑 樣品 RNA
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性
對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 小鼠肝炎病毒 PCR
陽性對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當
于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充分混勻，
此為 100 倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL 自備 TE 溶液中，充
分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加
水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂?br />水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提
取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手
冊可以從本公司網(wǎng)站天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號 61202 下載。
二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是
RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中
加入下列成分：
成份 N+2 個樣品管 RT-PCR
陰性對照
RT-PCR
陽性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer 各 4 μL 4 μL 4 μL
小鼠肝炎病毒 RT-PCR
引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2 個制備的樣品 各 12.5 μL 不加 不加
超純水 不加 12.5 μL 不加
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照
10000 倍稀釋液
不加 不加 12.5 μL
MMLV-Taq Mix 1.5 μL 1.5 μL 1.5 μL
4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:
過程 溫度 時間
逆轉(zhuǎn)錄 42℃ 30 分鐘
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
（30 個循環(huán)）
95℃ 30 秒
55℃ 30 秒
72℃ 60 秒
延伸 72℃ 5 分鐘
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 3750bp。
如果陰性對照有此擴增產(chǎn)物或陽性對照無此擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需
要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產(chǎn)物、陽性對照有此擴
增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有此擴增產(chǎn)物則為陽
性，如果無則為陰性。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 小鼠肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測試劑盒