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雞新城疫血凝抑制試驗抗原陽性血清與陰性血清說明書

獸用非處方藥

【獸藥名稱】

通用名稱：雞新城疫血凝抑制試驗抗原、陽性血清與陰性血清

英文名稱：Newcastle Disease Hemagglutination Inhibition Test Antigen，Positive Sera and Negative Sera

漢語拼音：Ji Xinchengyi Xueningyizhishiyan Kangyuan，Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing

【主要成分與含量】

抗原含有滅活的雞新城疫病毒，血凝效價應(yīng)≥1:512。陽性血清為雞新城疫高免的SPF雞血清，HI效價應(yīng)≥1:512。陰性血清為SPF雞血清。

【性狀】雞新城疫血凝抑制試驗抗原陽性血清與陰性血清說明書

抗原為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解；陽性血清和陰性血清均為微黃色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解。

【作用與用途】用于血凝抑制試驗檢測雞新城疫抗體。

【用法與判定】

1  血凝（HA）試驗操作方法

1.1 在V型微量反應(yīng)板中，每孔加0.025ml PBS溶液。

1.2 第1孔加入0.025ml抗原，依次作0.025ml的對倍稀釋至第11孔；為精確計算血凝單位，病毒懸液開始需作一系列密集稀釋，如1/3、1/4、1/5、1/6等。

1.3 每孔加0.025ml PBS溶液。

1.4 每孔加0.025ml 1%（V/V）雞紅細(xì)胞懸液。

1.5 將反應(yīng)板在振蕩器上振蕩1~2分鐘或輕叩反應(yīng)板混合反應(yīng)物，室溫（20~25℃）靜置15~30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘，當(dāng)對照孔的紅細(xì)胞顯著呈紐扣狀時判定結(jié)果。

1.6 結(jié)果判定  將反應(yīng)板傾斜60°，觀察紅細(xì)胞有無呈淚珠樣流淌，*無淚珠樣流淌（凝集）的稀釋倍數(shù)為血凝效價。表示1個HA單位（HAU），再根據(jù)開始的稀釋倍數(shù)精確計算血凝效價。

2  血凝抑制（HI）試驗操作方法

2.1 根據(jù)HA測定的效價，計算配制4個血凝單位（4HAU）抗原。

2.2 反應(yīng)板中每孔加入0.025ml PBS。

2.3 第1孔中加入0.025ml血清。

2.4 在反應(yīng)板上將血清做橫向0.025ml的對倍稀釋，至第10孔。

2.5 在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室溫下（20~25℃）靜置30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘。

2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的雞紅細(xì)胞懸液，輕晃混勻后，室溫（20~25℃）靜置20~40分鐘或2~8℃ 45~60分鐘，當(dāng)對照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時判定結(jié)果。

2.7 結(jié)果判定  以*抑制4HAU抗原的血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價。當(dāng)陽性血清的HI效價與已知效價誤差不超過1個滴度，陰性血清效價不高于1:4時，試驗方可成立。被檢樣品HI效價≤1:4判為陰性；等于1:8判為可疑（可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價≥1:8判為陽性，＜1:8判為陰性）；≥1:16判為陽性。雞新城疫血凝抑制試驗抗原陽性血清與陰性血清說明書

【注意事項】

（1）HA和HI試驗影響因素甚多，應(yīng)嚴(yán)格控制試驗條件，準(zhǔn)確控制紅細(xì)胞懸液和抗原工作濃度，同時應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和作用時間。

（2）用pH值7.0~7.2的PBS作稀釋液。

（3）抗原和陰、陽性血清若有污染，應(yīng)廢棄。

（4）使用時應(yīng)先測抗原的血凝價，根據(jù)所測結(jié)果，配制4個血凝單位的抗原，配好后的抗原應(yīng)在2小時內(nèi)用完。

（5）抗原開封后2~8℃保存，應(yīng)不超過3個月。切忌反復(fù)凍融。

【貯藏與有效期】  2~8℃保存，抗原、陽性血清和陰性血清有效期均為24個月。雞新城疫血凝抑制試驗抗原陽性血清與陰性血清說明書