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IHC之石蠟切片16種常見問題全解析
2020-12-14 閱讀(4350)
樣本的制備是IHC實驗成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后，需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過程中容易出現的16種問題
切片小技巧
②切片厚度3-4μm（淋巴結、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm；脂肪5-6μm）
④切片動作輕，用力均勻。
⑥刀片鋒利，切片角度5°，切片平整無褶皺和收縮。
⑧蠟塊表面有鈣點，應20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。
切片光面朝下展片、撈片。
攤片水溫利于展平又不熔化，必要時用20%酒精攤片。
細小組織（穿刺、內鏡小標本）可以多貼幾個。
在烘烤切片前應做好排水，烤片溫度高于石蠟熔點5-10℃。
問題1 細胞皺縮和收縮；核“起泡”變大損傷；膠原染色嗜堿性
原因：石蠟溫度過高。
解決方法：烤箱溫度高于石蠟熔點5-10℃為佳。
問題2 切片卷成致密團
原因：①刀鈍；②傾斜角太小；③切片太厚。
解決方法：①換新刀片；②如果間隙角充分，降低傾刀的斜度。
①組織固定、脫水、透明不*，浸蠟不透；浸蠟包埋溫度過高或時間過久。
解決方法：問題4過分的壓縮
原因：刀片鈍；組織或石蠟過軟；用力太猛，速度太快。
解決方法：②③
原因：刀刃不鋒利，刀間隙角度大；蠟塊內組織上下端留蠟邊太少或不整齊，刀邊碎片；室溫過低或石蠟過硬。
移動刀口或更換刀片，檢查刀的角度，清潔刀片和刀架背面；在低熔點的石蠟中重新包埋；提高室內溫度或溫暖蠟塊表面（哈氣等）；切片厚度適宜（根據組織類型）。
①②③④①②③④水，開啟加濕器；問題7 切片條帶彎曲不直
原因：②蠟塊下邊與刀口不平行；④組織本身硬度不一致。
③移動刀片或更換刀片；問題8 蠟塊組織脫落
原因：②蠟塊凍時間過長，切片時易出現蠟塊脫落現象。
②切片動作小、勻速。
①取材時未取中病灶，組織塊太大，太厚；③組織塊內組織不平坦；⑤切片時粗修過多（切削過深）或過少（沒切到足夠的深度）。
解決方法：②組織在包埋模中均勻鋪平；④切片方向：軟到硬，易到難，主到次。
①切片機維護不當，切片厚度設置錯誤；③石蠟過熱；解決方法：①降低切片厚度設置；③使用適合組織類型和密度熔點的石蠟；問題11 切片縱裂，損傷，刀痕
原因：②刀片缺口；④石蠟中有雜質。
①更換刀片或移動刀口；③仔細清潔刀刃以除去多余的石蠟堆積；問題12 切片厚薄不均勻/刀/百葉窗/搓衣板
原因：②切片刀不鋒利，刀間隙角（或傾斜度）太大；④切片機部件松動或磨損；⑤組織致密或堅實；⑥主軸伸出太長。解決方法：②更換刀片，減少傾斜度；④均速慢切；⑥主軸搖回復原。
①攤片溫度不合適，組織未充分伸展；③石蠟熔點低，過軟或室溫較高；④組織缺乏一致性。
①調小刀角度，邊切邊向蠟塊吹氣用10-20%酒精攤片，利用濃度差，水的張力來展片；③更換刀片或移動刀口；問題14 切片裂縫/碎裂
原因：②攤片水溫過高，攤片時間長導致過度延伸；④烤片前切片排水不凈。
解決方法：②在攤片時輕輕延伸蠟帶，去除褶皺和折疊；④在切片和漂片過程中，小心操作蠟帶；問題15 柵狀裂和龜裂
原因：②攤片水溫過高；④切片過程中過度冷凍。
解決方法：②降低攤片水溫；④勻速慢切，邊切邊對蠟塊吹氣。
撈片時切片下面有氣泡。
解決方法：②切片要干凈無污染；<span font-size:14px;"="" style="margin: 0px; padding: 0px;">③撈片前將組織下的氣泡趕走
