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脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
脂蛋白酯酶是脂肪細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞、乳腺細胞及巨噬細胞等實質(zhì)細胞合成的
一種酶，可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯，以供組織氧化供能和貯存，并在不
同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。
測定原理
脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生 4-硝基苯酚，在 400nm 有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、冷凍離心機、研缽、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制
試劑一：液體 105mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
樣品處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入
1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500
萬細胞加入 1mL 試劑一）加入試劑一，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，
間隔 7 秒，總時間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清待測。
3. 血清：直接測定。
測定操作
對照管 測定管
樣品（μL） 20 20
試劑一（μL） 80
試劑二（μL） 80
混勻，45℃水浴 10min
試劑三（μL） 100 100
充分混勻，25℃靜置 2min，于微量石英比色皿/96 孔板，測定
400nm 處吸光值，記為 A 對照管和 A 測定管，△A=A 測定管- A 對
照管
計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y= 0.0581x -0.0169，R
2
=0.9982
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一
個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△ A+0.0169）÷ 0.0581×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 17.21×（△ A+0.0169）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個
酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/g）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每 104個細胞每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為
一個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/104
cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣
總）÷T
 = 17.21×（△A+0.0169）÷細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一
個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反總÷V 樣÷T
 = 17.21×（△A+0.0169）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)
量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
b．用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y= 0.029x -0.0169，R
2
=0.9982
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一
個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△ A+0.0169）÷ 0.029×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T
= 34.42×（△ A+0.0169）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每克組織每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一個
酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/g）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每 104個細胞每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為
一個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/104
cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣
總）÷T
 =34.42×（△A+0.0169）÷細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：在 45℃，pH7.5 條件下，每毫升血清每分鐘水解產(chǎn)生 1μmol 4-硝基苯酚為一
個酶活力單位。
LPL 活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反總÷V 樣÷T
 = 34.42×（△A+0.0169）
V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.02mL；W：樣本質(zhì)
量，g；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，10min
注意事項
1. 試劑三加入混勻后靜置兩分鐘立即測定，否則影響吸光值。
2. 吸光值過高或者測定結(jié)果不穩(wěn)定，則將酶液進行適當?shù)南♂專⒃谟嬎愎街谐艘韵?br />釋倍數(shù)。