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上海雅吉生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒

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小鼠組織直接PCR試劑盒說明書

2021-6-7  閱讀(235)

產(chǎn)品簡介
本試劑盒采用*的包裝體系,包含了快速制備小鼠組織基因組DNA和后續(xù)PCR擴(kuò)增的
所有試劑,適用于從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中一步法提取基因組DNA并用于后續(xù)的
PCR擴(kuò)增和檢測。整個(gè)提取過程不包含勻漿、破碎、過夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱
式純化等操作,實(shí)驗(yàn)操作簡便、快捷,而且結(jié)果穩(wěn)定可靠。
本試劑盒提供的2 x Dir PCR MasterMix是一種高擴(kuò)增兼容性的PCR試劑,無需*
去除蛋白等雜質(zhì),便能進(jìn)行高效特異擴(kuò)增。該預(yù)混Mix包含抗體修飾的Taq DNA聚合酶、
dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑,操作時(shí)只需加入粗提模板和引物
即可進(jìn)行后續(xù)檢測,具有操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn),特別適合于高
通量的檢測篩選。Mix中預(yù)混有電泳染料,可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行電泳檢測,使用方便快
捷。PCR產(chǎn)物的3’端帶A,可進(jìn)行TA克隆。
產(chǎn)品特點(diǎn)
簡單快速:適用于從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中一步法基因鑒定。
高特異性:本產(chǎn)品所用Taq酶為抗體修飾熱啟動(dòng)酶,具有高效的模板和引物親和性及擴(kuò)增特
 異性,特別適合基因分型和轉(zhuǎn)基因鑒定。
基因檢測:本產(chǎn)品操作簡便,結(jié)果可靠,特別適合小鼠的高通量分析檢測。
注意事項(xiàng):請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。
2.組織裂解緩沖液Tissue Lysis Buffer應(yīng)放置于室溫保存,如放在低溫(-20℃或4℃)保存
時(shí)有沉淀析出,可在37℃水浴中重新溶解沉淀,并搖勻溶液后使用 。
3.本產(chǎn)品提供的2 x Dir PCR MasterMix 為2x母液,使用時(shí)需加入模板和引物,并加入滅菌
水補(bǔ)足體積,使其濃度為1x即可進(jìn)行反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)操作步驟
1.第一次使用本試劑盒時(shí),請仔細(xì)查看組織裂解緩沖液Tissue Lysis Buffer中是否有結(jié)晶析
出,如有結(jié)晶請將該緩沖液于室溫充分平衡至結(jié)晶*溶解,或在37℃水浴中重新溶解
沉淀搖勻后使用。組織裂解緩沖液溶解后在室溫保存。
2.按照下表配方配制組織消化液:
 組成成分 體 積
Tissue Lysis Buffer 96 µl
 Digestive Enzyme 4 µl
 Total 100 µl
 注意:消化液請盡量現(xiàn)用現(xiàn)配,以保證Digestive Enzyme的活性。
3.取少量小鼠組織樣品(約5~10 mg)于1.5 ml的離心管中,加入100 µl 組織消化液,確保
組織樣品*浸潤于組織消化液中,65℃處理30 min。期間每隔10 min左右輕彈管底,
提高消化效率。
4.消化結(jié)束后,瞬時(shí)離心,并于95~100℃下處理5 min。
5. PCR擴(kuò)增反應(yīng)。取1 µl上清用于PCR反應(yīng),參考PCR體系及擴(kuò)增程序如下:
參考反應(yīng)體系
PCR反應(yīng)體系的建立,25 µl體系如下:
 組成成分 體 積
2 x Dir PCR MasterMix 12.5 µl
 正向引物(10 µM) 0.5 µl
 反向引物(10 µM) 0.5 µl
 模板DNA 1.0 µl
RNase-Free ddH2O 補(bǔ)至25 µl

 



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