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產(chǎn)品及特點(diǎn)

Y 染色體上 95%是男性特異區(qū)域，里面含和男性有關(guān)的基因。SRY 基因

（Sex-determining Region on Y Chromosome ，SRY），雄性的性別決定基因，指 Y 染色體上具體決定生物雄性性別的基因片段。人的 SRY 基因位于 Yp11.3，只含有一個(gè)外顯子，沒(méi)有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄單位長(zhǎng)約 1.1kb，編碼一個(gè) 204 氨基酸的蛋白質(zhì)。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：

• 即開(kāi)即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增 SRY 基因。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分

成 份

編號(hào)

十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0

90805

1 mL（紅蓋）

超純水

100935

1 mL（亮黃色）

人 Y 染色體性別決定區(qū)

（SRY）PCR 引物混合液

13-190901yw

100 μL（白蓋）

人 Y 染色體性別決定區(qū)

（SRY）PCR 陽(yáng)性對(duì)照

（1×10E8 拷貝/μL）

60908-190901pc

50 μL（黃蓋）

使用手冊(cè)

13-190901sc

1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其

他試劑。

自備試劑

樣品 DNA。

使用方法

一、樣品 DNA 的制備

• 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
• 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人 Y 染色體性別決定區(qū)（SRY）PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

• 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè)PCR 管中分別加入下列成分：

成分

N+2 個(gè)

樣品管

PCR 陰性

對(duì)照

PCR 陽(yáng)性

對(duì)照

PCR Magic Mix 3.0

各 20 μL

20 μL

20 μL

人 Y 染色體性別決定區(qū)

（SRY）PCR 引物混合液

各 2 μL

2 μL

2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板

各 18 μL

-

-

PCR 陰性對(duì)照（水）

-

18 μL

-

PCR 陽(yáng)性對(duì)照（人 Y 染色體性別決定區(qū)（SRY） PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 100 倍

稀釋液）

-

-

18 μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

• 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng)性對(duì)照必須有 232bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除PCR 抑制劑的感染。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

人 Y 染色體性別決定區(qū)（SRY）（伯氏包柔螺旋體）可視化 LAMP 擴(kuò)增試劑盒