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技術(shù)文獻(xiàn)分享-ELISA試劑盒細(xì)節(jié)要求

時(shí)間:2020-12-25閱讀:266
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  技術(shù)文獻(xiàn)分享-ELISA試劑盒細(xì)節(jié)要求

 

  ◆ELISA需要遵循的幾個(gè)細(xì)節(jié)要點(diǎn):

  1、抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;

  2、抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

  3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

  ◆注意事項(xiàng):

  1、標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。保存過(guò)久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。

  2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強(qiáng)烈震蕩。

  3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。

  4、反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低,所以代測(cè)樣本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存。

  除了以上內(nèi)容,在ELISA試劑盒細(xì)節(jié)中,稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性。

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