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技術(shù)文獻分享-ELISA試劑盒細節(jié)要求
◆ELISA需要遵循的幾個細節(jié)要點:
1、抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其免疫學(xué)活性;
2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
◆注意事項:
1、標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
4、反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
除了以上內(nèi)容,在ELISA試劑盒細節(jié)中,稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
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