我們在使用分光光度計測量吸光度時為什么讀數(shù)會不斷變化？是因為顯色反應(yīng)還沒進行*還是什么其他原因？其實不然，靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。分光光度計的設(shè)計原理和工作原理，允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，儀器是有一定的準(zhǔn)確度和準(zhǔn)確度。
一、樣品的稀釋濃度
樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為使較大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。
二、核酸本身物化性質(zhì)
溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時，離子濃度太高也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0)，才能得到精確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導(dǎo)致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
三、分光光度計操作因素
1、使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。
2、儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
3、在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。
4、若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100”點，然后再測量。
5、比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
