分光光度計(jì)原理內(nèi)行人都知道，物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對(duì)光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對(duì)光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都是具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過(guò)溶液時(shí)，其能量就會(huì)被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理比耳定律。
然而對(duì)于分光光度計(jì)吸光度測(cè)量條件的選擇，相信很多人都不太了解，一般來(lái)說(shuō)可依據(jù)以下幾點(diǎn)去綜合選擇：
1.入射光波長(zhǎng)的選擇
應(yīng)根據(jù)吸收光譜曲線，選擇溶液具有吸收時(shí)的波長(zhǎng)作為入射光的波長(zhǎng)。
如顯色劑與鈷絡(luò)合物在420nm波長(zhǎng)處均有吸收峰。如用此波長(zhǎng)測(cè)定鈷，則未反應(yīng)的顯色劑會(huì)造成干擾而降低測(cè)定的準(zhǔn)確度。因此必須選擇在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定，在此波長(zhǎng)下顯色劑不發(fā)生吸收。而鈷絡(luò)合物則有一吸收平臺(tái)。
2.參比溶液的選擇
1）如果顯色劑或其他試劑略有吸收，應(yīng)用空白溶液（不加試樣的溶液）作參比溶液。
2）如果僅待測(cè)物與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┳鲄⒈热芤骸?/div>
3）如試樣中其他組分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng)，則當(dāng)顯色劑無(wú)吸收時(shí)，可用試樣溶液作參比溶液，當(dāng)顯色劑略有吸收時(shí)，可在試液中加入適當(dāng)掩蔽劑將待測(cè)組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。
3.吸光度讀數(shù)范圍的選擇
實(shí)踐證明，吸光度在0.2-0.5內(nèi)時(shí)，測(cè)量的相對(duì)誤差最小。
可用兩種方法來(lái)調(diào)整被測(cè)溶液的吸光度：
1）控制被測(cè)溶液的濃度。如改變?nèi)恿?，改變?nèi)芤旱臐饪s倍數(shù)或稀釋倍數(shù)。
2）選擇不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程長(zhǎng)的比色皿，吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
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