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人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基 血清/培養(yǎng)基

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  • 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基 血清/培養(yǎng)基

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參考價 2066
訂貨量 1
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號 AC-1001000
  • 品牌
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海

在線詢價 收藏產(chǎn)品 加入對比

更新時間:2022-12-13 13:48:01瀏覽次數(shù):562

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產(chǎn)品簡介

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司(Applied Cell®)自主研發(fā)的一款無外源動物成
分、化學(xué)成分明確且適用于無滋養(yǎng)層培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。該產(chǎn)品適用于 Essential 8 系統(tǒng)培養(yǎng)
的干細(xì)胞,可應(yīng)用于干細(xì)胞傳代,內(nèi)含干細(xì)胞保護因子,防止細(xì)胞的凋亡、分化,對細(xì)胞具有良好的保
護作用。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循 ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo)原則。

詳細(xì)介紹

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品基本信息


產(chǎn)品名稱Applied Cell ®人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基
貨 號AC-1001000
規(guī) 格基礎(chǔ)培養(yǎng)基 490mL,添加劑 10mL
保存條件基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2-8℃,添加劑-20~-80℃;混合后 2-8℃
使用范圍人多能干細(xì)胞擴增、傳代
保質(zhì)期12 個月










產(chǎn)品簡介

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司(Applied Cell®)自主研發(fā)的一款無外源動物成

分、化學(xué)成分明確且適用于無滋養(yǎng)層培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。該產(chǎn)品適用于 Essential 8 系統(tǒng)培養(yǎng)

的干細(xì)胞,可應(yīng)用于干細(xì)胞傳代,內(nèi)含干細(xì)胞保護因子,防止細(xì)胞的凋亡、分化,對細(xì)胞具有良好的保

護作用。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循 ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo)原則。

產(chǎn)品特性

? 無需滋養(yǎng)層細(xì)胞。

? 成分明確,批間差小。

? 適用于 Essential 8 系統(tǒng)培養(yǎng)的人多能干細(xì)胞。

? 無外源動物成分,大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險。

產(chǎn)品內(nèi)容

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相關(guān)產(chǎn)品

即用型基質(zhì)膠(Applied Cell®: AC-1001007)

人多能干細(xì)胞消化液(Applied Cell®: AC-1001008)

干細(xì)胞凍存液(治療級)(Applied Cell®:AC-1001006)


實驗準(zhǔn)備

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基配制

1) 2-8℃解凍 hPSC Medium Supplement,融化后上下晃動混勻,按實際用量進行分裝,立即使用或儲存于-20~ -80℃,避免反復(fù)凍融;

2) 按 1:50 的比例將 hPSC Medium Supplement(10mL)加入到 hPSC Medium BasalMedium(500mL)中,混合均勻即成為人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基?;靹蚝蟮娜硕嗄芨杉?xì)胞培養(yǎng)基可在2-8℃ 穩(wěn)定儲存 2-3 周,不建議使用配制已超過 3 周的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基。

3) 實驗試劑平衡:人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基實驗前放置室溫避光平衡;PBS,消化液等 37℃加熱。

注意:培養(yǎng)基中含有因子,不要 37℃水浴加熱。


操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)

hPSC 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 實驗操作步驟:

1.1 基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板:取出 6 孔板/12 孔板,每孔內(nèi)加入 1 mL/0.5 mL 即用型基質(zhì)膠(AC-1001007),

輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使基質(zhì)膠完.全覆蓋皿底,置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1h~2h,實驗前拿出并

置于超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時不用,可用 Parafilm 封口后 2-8℃ 儲存,并于 1 周內(nèi)使用。

注意:①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在 1×106cells/mL 左右,對應(yīng) 6 孔板 1 孔;②即用型基質(zhì)膠對

溫度敏感,即用即拿,用完后立即放回 4℃冰箱保存,且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身,影響基質(zhì)膠質(zhì)量。

1.2 先將 2~3mL 的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入 15mL 離心管中備用。

1.3 解凍:將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中,快速搖動,使其在 1~2min 內(nèi)快速解凍;

注意:細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快,盡量減少其暴露在室溫中的時間。

1.4 離心:凍存管中的凍存液解凍后,將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的 15mL 離心管中,將 15mL 離

心管置于低速離心機中配比平衡后,1000rpm 離心 3min;

1.5 重懸:離心后棄上清加 1mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對干細(xì)胞沉淀進行吹吸混勻,吹吸 3~5 次左右。

1.6 接種:吹吸均勻后,將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉,將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被好的 6 孔板中,并補全每孔 2mL 培養(yǎng)體系。

1.7 培養(yǎng):接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團塊大小,呈 4

個細(xì)胞以上的團塊較合格,水平十字輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使細(xì)胞均勻分布。并置于 37℃,5%CO2 的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),第 2 天觀察細(xì)胞貼壁情況;

1.8 換液:從復(fù)蘇的時間開始每 24h 換液一次。

注意:因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天,所以每 24h 應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。

hPSC 細(xì)胞傳代

2. 實驗具體操作步驟:

2.1 清洗:吸掉原有培養(yǎng)基,貼壁緩慢加入 1 mL PBS 緩沖液并輕輕晃動,然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 PBS緩沖液;

2.2 消化:在 6 孔板中加入 2mL/孔人多能干細(xì)胞消化液(AC-1001008)使之覆蓋皿底,并置于 37℃培養(yǎng)箱中 2~5 min;

注意:消化時間依據(jù)干細(xì)胞生長密度,消化時間略有不同,根據(jù)經(jīng)驗一般建議時間 2-5min。消化過

程中可以拿到倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙,即可吸掉消化液終止消化。

2.3 吹打:吸掉消化液后,加入 2mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基,用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底,輕柔吹打 3~5次,使皿底干細(xì)胞集落脫落,并將其并轉(zhuǎn)移到 15mL 離心管中;

注意:吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔,吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在 3~5 次為宜,盡量避免形成單細(xì)

胞。如有少量細(xì)胞無法從皿底脫落,屬于正?,F(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無法從皿底脫落,需延長消化時間。

2.4 離心:1000rpm 離心 3min;

2.5 接種:棄上清,用干細(xì)胞培養(yǎng)基吹打細(xì)胞 5-10 次,吸掉包被培養(yǎng)板中的基質(zhì)膠,并將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)板中,且補全每孔 2mL 的培養(yǎng)體系。

注意:吹打細(xì)胞要溫柔,并且吹打次數(shù)不要超過 10 次,并且

2.6 換液:從傳代的時間開始每 24h 換液一次。

注意:因培養(yǎng)基中活性成分只足夠維持一天,所以每 24h 應(yīng)及時更換新鮮培養(yǎng)基。

hPSC 細(xì)胞凍存

3. 實驗具體操作步驟

3.1 清洗:同 2.1;

3.2 消化:同 2.2;

3.3 吹打:同 2.3;


3.4 離心:同 2.4;

3.5 重懸:離心后棄上清,加入 2 mL 無血清干細(xì)胞凍存液(AC- 1001006)對干細(xì)胞沉淀進行吹吸混

勻,吹吸 3~5 次后,將其加入到凍存管中;

注意:凍存液即用即拿,及時放回 4℃冰箱。

3.6 記錄:在凍存管上標(biāo)記凍存細(xì)胞種類、時間、操作者及細(xì)胞批次。

3.7 -80℃冰箱凍存:凍存管置于-80℃冰箱過夜。

注意:凍存管放置于-80℃冰箱時,要將凍存管直立放置,切忌凍存管斜放或橫放。

3.8 液氮凍存:24 小時后將-80℃冰箱中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮中長期凍存。

細(xì)胞形態(tài)圖

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質(zhì)量控制

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