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三大內(nèi)參抗體&五大標簽抗體

時間:2021-12-13閱讀:1577

三大內(nèi)參:
beta Actin,肌動蛋白,細胞骨架蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。beta Actin 作為內(nèi)參是得到*的,針對大多數(shù)組織和細胞來說的,它廣泛分布于細胞質(zhì)內(nèi),表達量非常豐富。但是在一些少量特殊的情況下比如脂肪組織和細胞內(nèi),beta Actin 的表達量就很少。

GAPDH,甘油醛-3-磷酸脫氫酶,該酶是糖酵解反應(yīng)中的一個酶,幾乎在所有組織細胞中都高水平表達,在同種細胞或組織中的表達量一般是恒定的,且很少受外部誘導物的影響。但比如缺氧和糖尿病等疾病存在下,會增加 GAPDH 在特定細胞和組織中的表達。

beta Tubulin,微管蛋白,細胞骨架蛋白。作為內(nèi)參抗體,beta Tubulin 表達通常不會發(fā)生改變,因此被廣泛用于 Western Blot 內(nèi)參,也常被用于免疫染色觀察細胞的微管結(jié)構(gòu)。

標簽抗體:

Flag抗體-抗Flag標簽抗體
融合標簽,如Flag、GST等標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白。

His抗體-抗His標簽抗體

融合標簽根據(jù)其相對分子質(zhì)量大小可以分為兩大類:大的蛋白質(zhì)分子和小的多肽片段。融合標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。

GST抗體-抗GST標簽抗體

隨著越來越多的新基因的發(fā)現(xiàn),基因融合蛋白表達體系以其在新發(fā)現(xiàn)蛋白研究中的顯著優(yōu)勢已得到廣泛應(yīng)用。其中GST標簽體系具有蛋白表達產(chǎn)率高、表達產(chǎn)物純化方便,以及利于GST抗體制備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可從細菌裂解液中提取,在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解,從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個非常好的強免疫原,因此,很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優(yōu)點,商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST標簽抗體系統(tǒng)至今仍被廣泛應(yīng)用。

GFP抗體-抗GFP標簽抗體

常用的標簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein),簡稱GFP,這種蛋白質(zhì)zui早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì),在藍色波長范圍的光線激發(fā)下,會發(fā)出綠色螢光。

Myc抗體-抗Myc標簽抗體

隨著蛋白質(zhì)組學的迅猛發(fā)展,重組蛋白質(zhì)的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標簽如GST、Myc、His等,可用于輔助目標蛋白的純化,這已經(jīng)被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。在1985年開發(fā)出鼠抗c-myc標簽抗體并被作為免疫化學試劑用于細胞生物學和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域中。Myc標簽(序列為:EQKLISEEDL)已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。

HA抗體-抗HA標簽抗體

融合標簽,如HA、His等標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標簽系統(tǒng)利用一個HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。

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1.Tag-Agarose beads產(chǎn)品

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