6
產(chǎn)品信息
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
wb30520-1KU | TEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶 | 1KU | 1000 |
wb30520-5KU | TEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶 | 5KU | 4599 |
產(chǎn)品描述
重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在guanxianan和ganansuan/siansuan之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30°C時可達(dá)到zuijia活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30°C的廣泛范圍內(nèi)皆有活性，使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His標(biāo)簽，通過Ni-NTA（P7151）樹脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
產(chǎn)品性質(zhì)
來源（Source） | 大腸桿菌 |
外觀（Appearance） | 無色透明液體 |
比活力（Specific Activity） | 10 U/μl |
活性定義（Unit Definition） | 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反應(yīng)1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。 |
純化（Purification ） | Ni親和純化 |
純度（Purity） | ≥95%（by SDS-PAGE） |
產(chǎn)品組分
TEV Protease儲存液 | 10X Cleavage Buffer |
25 mM Tris-HCl，pH 8.0 | 10 mM DTT |
150 mM NaCl | 500 mM Tris-HCl，pH 8.0 |
50 mM DTT | 50 mM DTT |
1Mm EDTA |
|
50%（V / V）Glycerin |
|
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。
1. 在EP管中配制如下反應(yīng)體系，
融合蛋白 | 50 μg |
rTEV Protease | 2μl(10U/μl) |
rTEV buffer （10×） | 10μl |
ddH2O（超純水） | up to 150 μl |
2.反應(yīng)時間參考表
反應(yīng)體系 | 不同溫度下參考反應(yīng)時間 | ||
4°C | 20°C | 30°C | |
反應(yīng)時間 | 15-16h | 6h | 2h |
待測融合蛋白100µg，加入TEV Protease 2µl，4℃反應(yīng)16小時，取酶切前后樣品SDS-PAGE檢測，如右圖所示 >90% 融合蛋白被切割。
TEV Protease活性測試
長期儲存于 -80℃，可保存2年；或小量分裝后保存于 -20℃，可保存6個月，避免反復(fù)凍融。10X rTEV buffer （10×）Buffer置于 -20℃保存。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
