丙二醛（MDA）是脂質過氧化作用的天然副產物，被廣泛用作確定氧化應激和自由基形成的關鍵指標。MDA的測量在歷*一直依賴于與硫代*酸（TBA）的反應，以產生可以比色法或比色法測量的化合物。但是該測定法并非特定于MDA，而且還可以在90-100°C的酸性條件下進行。已經有許多商業(yè)化的ELISA試劑盒，這使其更加昂貴和乏味。Amplite™比色丙二醛（MDA）定量試劑盒提供了快速，方便的方法來測量MDA，而無需使用TBARS加熱步驟。MDA Blue™與MDA反應生成藍色產物，該產物用酶標儀在695 nm下測量。

1. 準備測試樣品以及系列稀釋的MDA標準品（50 µL）

2. 添加MDA Blue™儲備溶液（10 µL）

3. 在室溫下孵育10-30分鐘

4. 添加反應溶液（40 µL）

5. 在室溫下孵育30-60分鐘

6. 監(jiān)測OD在695 nm處的增加

重要說明
開始實驗前，請在室溫下解凍所有組分。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. MDA標準溶液（100 mM）：
將100 µL ddH ₂ O加入MDA標準樣品瓶（組分C）中，制成100 mM MDA儲備溶液。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

向996 µL稀釋緩沖液（組分B）中加入4 µL 100 mM MDA標準液，得到400 µM MDA溶液（MDA7）。然后在稀釋緩沖液中進行1：2的系列稀釋，以得到系列稀釋的MDA標準品（MDA6-MDA1）。

程序

表1.  MDA標準品和測試樣品在96孔透明底部微孔板中的布局。MDA = MDA標準品（MDA1-MDA7，6.25至400 µM），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成。

1. 根據表1和2中提供的布局，準備MDA標準品（MDA），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑，而不是50 µL。
   

2. 在MDA標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入10 µL MDA Blue™（組分A）溶液。對于384孔板，在每個孔中使用5 µL MDA Blue™溶液。
   

3. 將反應混合物在室溫下孵育10-30分鐘。
   

4. 加入40 µL反應溶液（組分D）使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，請使用20 µL反應溶液，總測定體積為50 µL /孔。
   

5. 將zui終反應混合物在室溫下孵育30-60分鐘。
   

6. 使用吸光度板讀數器監(jiān)控吸光度，并在695?700 nm的OD下進行路徑檢查校正。

數據分析

2.82.11.40.7400200- Formaldehyde- Glyceraldehyde- MDAData legendGenerated with Quest Graph™Aldehyde Concentration (uM)AbsHover mouse to interact

從空白標準孔獲得的讀數（Abs）用作陰性對照。從其他標準的讀數中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數，以獲得標準曲線和方程式。該方程式可用于計算醛濃度樣品。我們建議您使用在線線性回歸計算器