辣根過(guò)氧化物酶（HRP）和HRP共軛物在過(guò)氧化氫的存在下促進(jìn)ABTS氧化，使ABTS變成其藍(lán)綠色氧化產(chǎn)物。ReadiUse™TMB底物溶液是TMB底物與過(guò)氧化氫的預(yù)混合溶液。與HRP或HRP共軛物相互作用時(shí)，它會(huì)生成藍(lán)色產(chǎn)物，而無(wú)需添加過(guò)氧化氫?？扇苄运{(lán)色產(chǎn)物可以在650 nm處定量。使用終止液可將靈敏度提高2-4倍，所得黃色溶液可在450 nm處讀取。ReadiUse™TMB底物解決方案提供了方便且超靈敏的定量底物系統(tǒng)。

事項(xiàng)在使用之前，將ReadiUse™TMB溫?zé)峤鉀Q方案調(diào)至室溫。 注意：試劑應(yīng)按原樣使用，無(wú)需稀釋。

程序

1. 孵育HRP標(biāo)記的試劑后，洗滌測(cè)定板。
   

2. 在每個(gè)孔中加入100 µL ReadiUse™TMB解決方案。
   

3. 在室溫下將板孵育15至30分鐘，或直至形成所需的顏色。注意：孵育時(shí)間取決于測(cè)定條件。
   

4. 使用ELISA微孔板讀數(shù)器測(cè)量650 nm處的吸光度信號(hào)。注意：如果需要，可以通過(guò)向每個(gè)孔中添加等體積的2M硫酸來(lái)終止反應(yīng)。終止反應(yīng)應(yīng)在450 nm處讀取。

數(shù)據(jù)分析

10.110.1- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™HRP (mU/mL)AbsorbanceHover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)（吸光度）用作陰性對(duì)照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。該公式可用于計(jì)算HRP樣本。我們建議您使用在線線性回歸計(jì)算器，

普通儲(chǔ)備溶液的制備

表1.重構(gòu)ReadiUse™TMB底物溶液比質(zhì)量所需的體積*針對(duì)HRP綴合物的ELISA測(cè)定進(jìn)行了優(yōu)化*至給定濃度。請(qǐng)注意，該體積僅用于制備儲(chǔ)備溶液。有關(guān)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)/生理緩沖液，請(qǐng)參閱樣本實(shí)驗(yàn)方案。