會(huì)員.png)
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| 分子量 | 激發(fā)（nm） | 發(fā)射（nm） | 消光系數(shù)（cm -1 M -1） | 量子產(chǎn)率 |
| 863.96 | 555 | 569 | 150000 1 | 0.04 1， |
對(duì)于許多免疫組織化學(xué)（IHC）應(yīng)用，傳統(tǒng)的酶促擴(kuò)增程序足以實(shí)現(xiàn)足夠的抗原檢測。但是，有幾個(gè)因素限制了這些過程的敏感性和實(shí)用性。乙酰胺信號(hào)放大（TSA）已被證明是一種特別通用且功能強(qiáng)大的酶放大技術(shù)，具有更高的測定靈敏度。TSA基于HRP在低濃度過氧化氫存在下將標(biāo)記的含酪胺底物轉(zhuǎn)化為可與HRP或附近的laoansuan殘基共價(jià)結(jié)合的氧化的高反應(yīng)性自由基的能力。為了實(shí)現(xiàn)zui大程度的IHC檢測，酪胺預(yù)先標(biāo)記有熒光團(tuán)。通過每個(gè)過氧化物酶標(biāo)記的多個(gè)酪酰胺底物的更新而產(chǎn)生的信號(hào)放大轉(zhuǎn)化為低豐度靶標(biāo)的超靈敏檢測以及使用更少量的抗體和雜交探針。在免疫組織化學(xué)應(yīng)用中，源自TSA方法的靈敏度增強(qiáng)可以增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號(hào)，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或目標(biāo)表達(dá)水平低而導(dǎo)致的免疫標(biāo)記弱的問題。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標(biāo)準(zhǔn)Cy3過濾器套件輕松檢測到。從TSA方法獲得的靈敏度增強(qiáng)允許增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號(hào)，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或靶標(biāo)表達(dá)水平低而導(dǎo)致的弱免疫標(biāo)記。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標(biāo)準(zhǔn)Cy3過濾器套件輕松檢測到。從TSA方法獲得的靈敏度增強(qiáng)允許增加一抗稀釋度以減少非特異性背景信號(hào)，并且可以克服由于次優(yōu)固定程序或靶標(biāo)表達(dá)水平低而導(dǎo)致的弱免疫標(biāo)記。Cy3酪酰胺含有明亮的Cy3，可使用標(biāo)準(zhǔn)Cy3過濾器套件輕松檢測到。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | Cy3 / TRITC濾波器組 |
| 發(fā)射 | Cy3 / TRITC濾波器組 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | Cy3 / TRITC濾波器組 |
修復(fù)/透化/阻斷細(xì)胞或組織
在封閉緩沖液中添加一抗
加入結(jié)合HRP的二抗
準(zhǔn)備酪酰胺工作溶液，并在室溫下在細(xì)胞或組織中涂抹5-10分鐘
貓。＃ | 產(chǎn)品名稱 | 單元 | 防爆（nm） | Em（nm） |
11070 | AF 488酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 491 | 518 |
11075 | AF 546酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 554 | 570 |
11082 | AF 594酪酰胺試劑 | 200張幻燈片 | 590 | 617 |
11061 | 疊氮基-Cy5酪酰胺 | 1毫克 | 644 | 665 |
11065 | Cy3酪酰胺 | 1毫克 | 555 | 565 |
11066 | Cy5酪酰胺 | 1毫克 | 644 | 665 |
45100 | iFluor TM 488乙酰胺 | 200張幻燈片 | 491 | 514 |
45105 | iFluor TM 555乙酰胺 | 200張幻燈片 | 552 | 567 |
45110 | iFluor TM 647酪酰胺 | 200張幻燈片 | 649 | 665 |
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
酪酰胺儲(chǔ)備溶液（1000X）：
添加適量的DMSO，制成1-5 mM的酪酰胺儲(chǔ)備溶液。注意：未使用的乙酰胺儲(chǔ)備溶液可在2-8 o C下儲(chǔ)存。
準(zhǔn)備工作溶液
酪酰胺工作溶液（1X）：
將1 µL酪酰胺儲(chǔ)備溶液添加到1 mL所選的包含0.003％H 2 O 2的緩沖液中。 注意：可以使用pH = 7.4的Tris Buffer以獲得*性能。注意：應(yīng)立即使用Tyramide工作溶液，并在使用當(dāng)天變新鮮。
程序
該方案適用于細(xì)胞和組織染色。
細(xì)胞固定和通透性
在室溫下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定細(xì)胞或組織20分鐘。
用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。
在室溫下用0.1％Triton X-100溶液透化細(xì)胞1-5分鐘。
用PBS沖洗細(xì)胞或組織兩次。
組織固定，脫石蠟和補(bǔ)液
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)IHC規(guī)程對(duì)組織進(jìn)行脫蠟和脫水處理。根據(jù)需要使用特定溶液/協(xié)議進(jìn)行抗原修復(fù)。
過氧化物酶標(biāo)記
可選：通過在過氧化物酶淬滅溶液（例如3％過氧化氫）中孵育細(xì)胞或組織樣品10分鐘來淬滅內(nèi)源性過氧化物酶活性。在室溫下用PBS沖洗兩次。
可選：如果使用結(jié)合HRP的鏈霉親和素，建議通過shengwusu封閉緩沖液封閉內(nèi)源性shengwusu.
在4°C下用的封閉溶液（例如含1％BSA的PBS）封閉30分鐘。
除去封閉溶液，并添加在推薦抗體稀釋液中稀釋的di一抗體，在室溫下放置60分鐘，或在4°C下放置過夜。
用PBS洗滌3次，每次5分鐘。
將100 µL二級(jí)抗體-HRP工作溶液應(yīng)用于每個(gè)樣品，并在室溫下孵育60分鐘。注意：孵育時(shí)間和濃度可以根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度而變化。
用PBS洗滌3次，每次5分鐘。
酪酰胺標(biāo)記
準(zhǔn)備并向每個(gè)樣品中加入100 µL的Tyramide工作溶液，并在室溫下孵育5-10分鐘。 注意：如果觀察到非特異性信號(hào)，則可以縮短與Tyramide的孵育時(shí)間。您應(yīng)該在不同的孵育時(shí)間點(diǎn)使用陽性和陰性對(duì)照樣品優(yōu)化孵育時(shí)間?；蛘吣梢栽诠ぷ魅芤褐惺褂幂^低濃度的乙酰胺。
用PBS沖洗3次。
復(fù)染和熒光成像
根據(jù)需要對(duì)細(xì)胞或組織樣本進(jìn)行復(fù)染。AAT提供了一系列核復(fù)染色試劑，如表1所示。請(qǐng)按照試劑隨附的說明進(jìn)行操作。
使用具有防褪色特性的安裝介質(zhì)安裝蓋玻片。
使用適當(dāng)?shù)倪^濾器設(shè)置以可視化來自Tyramide標(biāo)記的信號(hào)。
iFluor™ 488酪胺 iFluor™ 488 tyramide 1 mg Azido-Cy5酪胺 Azido-Cy5 tyramide 1 mg Cy3 酪胺 Cy3 tyramide 1 mg Amplite™熒光法熒光胺蛋白質(zhì)定量試劑盒 *藍(lán)色熒光* Amplite™ Fluorimetric Fluorescamine Protein Quantitation Kit *Blue Fluorescence* 1 kit Amplite™熒光法蛋白定量試劑盒*橙色熒光* Amplite™ Fluorimetric Protein Quantitation Kit *Orange Fluorescence* 500 Tests Portelite™熒光法蛋白定量試劑盒 Portelite™ Fluorimetric Protein Quantitation Kit 200 Tests Amplite™比色法葡萄糖氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Colorimetric Glucose Oxidase Assay Kit 1 kit
