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葡萄糖氧化酶是一種二聚體蛋白，可催化β-D-葡萄糖氧化為過氧化氫和D-葡萄糖基1,5-內(nèi)酯，后者水解為葡萄糖酸。它被廣泛用于測定體液中的葡萄糖以及從飲料，食品和其他農(nóng)產(chǎn)品中去除殘留的葡萄糖和氧氣。此外，葡萄糖氧化酶通常用于生物傳感器中以檢測葡萄糖。Amplite™葡萄糖氧化酶測定試劑盒提供了一種快速靈敏的方法來測定溶液中的葡萄糖氧化酶。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。該試劑盒使用我們的Amplite™Red底物，可以使用酶標(biāo)儀在570 nm處進(jìn)行監(jiān)測。
| 吸光度酶標(biāo)儀 | |
| 吸光度 | 570納米 |
| 推薦板 | 清除底部 |
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（50毫升） |
| 成分C：辣根過氧化物酶（HRP） | 1個(gè)小瓶 |
| 成分D：葡萄糖氧化酶 | 1瓶（100單位） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
| 成分F：葡萄糖 | 1個(gè)小瓶 |
協(xié)議摘要
準(zhǔn)備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
添加工作溶液（50 µL）
在37°C下孵育10-30分鐘
監(jiān)測OD = 570 nm處的吸光度
重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）：
將100 µL DMSO（組分E）添加到Amplite™Red（組分A）小瓶中。注意：Amplite™Red在存在硫醇（如二硫蘇糖醇（DTT））的情況下不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH 7 – 8下進(jìn)行。建議使用提供的測定緩沖液（pH 7.4）。
2. HRP儲(chǔ)備溶液（50X）：
將1毫升測定緩沖液（組分B）添加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.葡萄糖氧化酶原液（100 U / mL）：
將1 mL測定緩沖液（組分B）添加到小瓶葡萄糖氧化酶（組分D）中。
4.葡萄糖儲(chǔ)備溶液（10X）：
將5 mL測定緩沖液（組分B）添加到葡萄糖小瓶（組分F）中。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計(jì)
通過將2 µL的100 U / mL葡萄糖氧化酶原液稀釋到200 µL的測定緩沖液（組分B）中以制備1000 mU / mL的葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液，從而制備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液。然后xianjin行1：100連續(xù)稀釋，然后再進(jìn)行1：2連續(xù)稀釋，以獲得從10 mU / mL到0.156 mU / mL（GOS1- GOS7）的系列稀釋葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液。
準(zhǔn)備工作溶液
將20 µL的Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X），100 µL的HRP儲(chǔ)備液（50X）和500 µL的葡萄糖儲(chǔ)備液（10X）加入4.3 mL的測定緩沖液（組分B）中，制成5 mL的工作溶液。
程序
表1. 在透明底部96孔微孔板中葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。GOS =葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（GOS1- GOS7，0.156至10 mU / mL），BL =空白對照，TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| GOS1 | GOS1 | ... | ... |
| GOS2 | GOS2 | ... | ... |
| GOS3 | GOS3 | ||
| GOS4 | GOS4 | ||
| GOS5 | GOS5 | ||
| GOS6 | GOS6 | ||
| GOS7 | GOS7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| GOS1-GOS7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.156至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 測試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（GOS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
在每個(gè)孔中添加50 µL工作溶液到葡萄糖氧化酶標(biāo)準(zhǔn)液，空白對照和測試樣品中，使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，將25 µL GO工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
避光保存，在37°C下將反應(yīng)孵育10至30分鐘。
使用吸光度板讀數(shù)器在OD = 570 nm處監(jiān)控吸光度的增加。
11300 Amplite™熒光法葡萄糖氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glucose Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11301 Amplite™熒光法髓過氧化物酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Myeloperoxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit 11302 Amplite™熒光法guansuan氧化酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Glutamate Oxidase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
