乙酰danjian酯酶，也稱為AChE，是一種降解（通過其水解活性）神經(jīng)遞質(zhì)乙酰danjian，產(chǎn)生danjian和乙酸酯基的酶。它主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)肌肉接頭和danjian能突觸中發(fā)現(xiàn)，其活性用于終止突觸傳遞。AChE具有很高的催化活性-每個AChE分子每秒降解約5000個乙酰danjian分子。乙酰danjian酯酶也存在于紅細(xì)胞膜上，構(gòu)成Yt血型抗原。乙酰danjian酯酶以多種分子形式存在，它們具有相似的催化特性，但它們的寡聚體組裝和與細(xì)胞表面的附著方式不同。該Amplite™熒光乙酰danjian酯酶測定試劑盒為檢測AChE活性提供了zui靈敏的方法。該試劑盒使用我們出色的Thiolite Green™來定量AChE水解乙酰danjian產(chǎn)生的danjian。Thiolite Green™的熒光強(qiáng)度與巰基danjian的形成成正比，因此與AChE活性成正比。

組件

1. 準(zhǔn)備AChE標(biāo)準(zhǔn)品和/或AChE測試樣品（50 µL）

2. 添加AChE工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育10-30分鐘

4. 監(jiān)測Ex / Em = 490/525 nm的熒光強(qiáng)度

重要說明
開始實(shí)驗(yàn)之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。

細(xì)胞樣品的制備

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Thiolite™Green儲備溶液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）添加到Thiolite™Green（組分A）小瓶中，制成200X Thiolite™Green儲備溶液。

2.乙酰硫danjian儲備溶液（500X）：
將0.6 mL的ddH ₂ O加入小瓶的乙酰硫danjian（組分C）中。

3.乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)儲備液：
將100 µL 含0.1％BSA 的ddH ₂ O加入小瓶乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）中，制成50 U / mL乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

將20 µL的50 U / mL乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液加到980 µL的測定緩沖液（組分C）中，以生成1000 mU / mL的乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1000 mU / mL乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（1:10）得到100 mU / mL乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋以獲得剩余的連續(xù)稀釋的乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。注意：稀釋的乙酰danjian酯酶標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。

準(zhǔn)備工作溶液

將10μL乙酰硫danjian儲備溶液（500X）和25μLThiolite™Green儲備溶液（200X）加入5 mL測定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.03 mL乙酰danjian酯酶（AChE）工作溶液。注意： AChE工作溶液不穩(wěn)定，需要在30分鐘內(nèi)使用。遠(yuǎn)離光線。