乳酸是手性的并且具有兩個光學(xué)異構(gòu)體：L-乳酸和D-乳酸。在代謝和運(yùn)動過程中，丙酮酸經(jīng)常通過乳酸脫氫酶（LDH）從丙酮酸中產(chǎn)生。監(jiān)測乳酸水平是評估組織需氧量和利用之間平衡的好方法，對研究細(xì)胞和動物生理學(xué)很有用。D-乳酸不被哺乳動物代謝，其從體內(nèi)的清除主要取決于腎臟的排泄。D-乳酸和L-乳酸存在于許多發(fā)酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制的肉和魚中。D-乳酸和L-乳酸（由細(xì)菌產(chǎn)生）是食品（例如雞蛋，牛奶，果汁和葡萄酒）的質(zhì)量指標(biāo)。血液中D-乳酸的異常高濃度通常反映了胃腸道中細(xì)菌過度生長。AAT Bioquest的Amplite™乳酸檢測試劑盒（用于L-乳酸檢測的產(chǎn)品目錄號為13814和13815，用于D-乳酸檢測的產(chǎn)品目錄號為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的檢測L-乳酸或D-乳酸的方法生物樣品，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品中。在酶聯(lián)測定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行專門監(jiān)測。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™D-乳酸分析試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM D-乳酸。s Amplite™乳酸測定試劑盒（用于L-乳酸測定的產(chǎn)品目錄號為13814和13815，對于D-乳酸測定的產(chǎn)品目錄號為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，可用于檢測生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸樣本，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣本。在酶聯(lián)測定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行專門監(jiān)測。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™D-乳酸分析試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM D-乳酸。s Amplite™乳酸測定試劑盒（用于L-乳酸測定的產(chǎn)品目錄號為13814和13815，對于D-乳酸測定的產(chǎn)品目錄號為13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，可用于檢測生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸樣本，例如血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣本。在酶聯(lián)測定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行專門監(jiān)測。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™D-乳酸分析試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM D-乳酸。（D.乳酸檢測的Cat＃13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，用于檢測血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品等生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶聯(lián)測定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行專門監(jiān)測。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™D-乳酸分析試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM D-乳酸。（D.乳酸檢測的Cat＃13810和13811）提供了基于熒光和吸光度的方法，用于檢測血清，血漿，尿液以及細(xì)胞培養(yǎng)樣品等生物樣品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶聯(lián)測定中，乳酸鹽與NADH成比例相關(guān)，NADH可通過熒光NADH傳感器進(jìn)行專門監(jiān)測。信號可以通過熒光酶標(biāo)儀讀取。使用此Fluorometric Amplite™D-乳酸分析試劑盒，我們能夠在100 µL反應(yīng)體積中檢測到低至1.4 µM D-乳酸。

1. 準(zhǔn)備D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)液或測試樣品（50 µL）
2. 加入D-乳酸工作溶液（50 µL）
3. 在室溫下孵育30分鐘-2小時
4. 監(jiān)控Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光增加

重要說明
開始實(shí)驗(yàn)前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. NAD儲備溶液（100X）：
將100 µL H ₂ O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲備溶液。

2. D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將200 µL H ₂ O或1x PBS緩沖液加到D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）的小瓶中，制成100 mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計(jì)

向990 µL 1x PBS緩沖液中加入10 µL 100 mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，以生成1 mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取1 mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7），并在1x PBS緩沖液中進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到系列稀釋的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)液（SD6- SD1）。注意：稀釋的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時內(nèi)使用。 

準(zhǔn)備工作溶液

1.將5 mL測定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中，并充分混合。

2.將50 µL 100X NAD儲備溶液添加到組分A + B的瓶子中，并充分混合以制成D-乳酸鹽工作溶液。 注意：這種D-乳酸工作溶液足以容納一個96孔板。避光。

程序

表1.  黑色96孔微孔板中D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。SD = D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)液（SD1-SD7，1至1000 µM），BL =空白對照，TS =測試樣品。 

表2.  每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，準(zhǔn)備D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)液（SD），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL 。
    
2. 向D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL D-乳酸工作溶液，以使D-乳酸的總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，應(yīng)在每個孔中添加25 µL D-乳酸工作溶液，總體積為50 µL /孔。
    
3. 在避光的條件下，將反應(yīng)在室溫下孵育30分鐘至2小時。
    
4. 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm，截止= 570 nm）下監(jiān)測熒光的增加。

數(shù)據(jù)分析

1e+4100010010- Dose-responseData legendGenerated with Quest Graph™D-Lactate (uM)RFUHover mouse to interact

從空白標(biāo)準(zhǔn)孔獲得的讀數(shù)（RFU）用作陰性對照。從其他標(biāo)準(zhǔn)的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，以獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和方程式。此方程式可用于計(jì)算D-乳酸樣本。