過(guò)氧亞硝酸鹽（ONOO-）是一種強(qiáng)氧化劑，是一種高活性硝化劑。過(guò)氧亞硝酸鹽是由細(xì)胞中產(chǎn)生的超氧自由基與一氧化氮之間的反應(yīng)形成的。它可以破壞各種各樣的生物分子，包括蛋白質(zhì)，酶，脂質(zhì)和核酸，zui終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。由于其極短的半衰期和低的穩(wěn)態(tài)濃度，因此檢測(cè)和定量溶液中的過(guò)氧亞硝酸鹽一直是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。為了滿足這一需求，AAT Bioquest的Amplite™熒光過(guò)氧亞硝酸鹽定量試劑盒提供了一種靈敏的工具來(lái)測(cè)量溶液中的ONOO-。DAX-J2™PON Green 99與ONOO-反應(yīng)生成亮綠色熒光產(chǎn)物。特別是它與ONOO-發(fā)生反應(yīng)，對(duì)其他活性氧（ROS）和活性氮（RNS）具有高選擇性。該套件可與熒光酶標(biāo)儀和光譜儀一起使用。

1. 準(zhǔn)備過(guò)氧亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)和/或測(cè)試樣品（50 µL）

2. 添加過(guò)氧亞硝酸鹽工作溶液（50 µL）

3. 在室溫下孵育5-10分鐘

4. 在Ex / Em = 490/530 nm處監(jiān)控?zé)晒?/p>

重要說(shuō)明
使用前，將所有套件組件解凍至室溫。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，制備后應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. DAX-J2™PON Green 99儲(chǔ)備溶液（500X）：
將20 µL DMSO（組分C）添加到DAX-J2™PON Green 99（組分A）小瓶中，制成500X儲(chǔ)備溶液。注意：20 µL的重新配制的DAX-J2™PON Green 99儲(chǔ)備溶液足以容納1個(gè)板。遠(yuǎn)離光線。

2.過(guò)氧亞硝酸鹽（ONOO）儲(chǔ)備溶液（未提供）：
根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道合成過(guò)氧亞硝酸鹽儲(chǔ)備溶液。簡(jiǎn)而言之，用鹽酸（0.6M）酸化yaxiaosuanna（0.6M）和過(guò)氧化氫（0.7M）的混合物，并在1-2秒內(nèi)加入氫氧化鈉（1.5M）以使溶液呈堿性。使溶液通過(guò)短的二氧化錳柱除去過(guò)量的過(guò)氧化氫。過(guò)氧亞硝酸鹽溶液在0.1 M NaOH中的消光系數(shù)在302 nm下為1670 M ^-1 cm ^-1。ONOO的儲(chǔ)備溶液不穩(wěn)定。我們強(qiáng)烈建議使其新鮮使用。

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)

在測(cè)定緩沖液（組分B）中稀釋過(guò)氧亞硝酸鹽（ONOO）儲(chǔ)備液，以得到20 µM ONOO標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后進(jìn)行1：2系列稀釋?zhuān)缘玫较盗邢♂尩腛NOO標(biāo)準(zhǔn)溶液（O7-O1）。

準(zhǔn)備工作溶液

將20μL的500X DAX-J2™PON Green 99儲(chǔ)備溶液添加到10 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中并充分混合。注意：此分析混合物足以用于一個(gè)96孔板。避光。