BY4741感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化，經(jīng)pYES2質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)103cfu/ugDNA-80℃可保存三個(gè)月。

基因型為:MATahis31leu2met15ura3-52

產(chǎn)品特點(diǎn):

BY4741菌株來源于釀酒酵母原始菌株-S288C，是實(shí)驗(yàn)室的常用菌株，為配子MATa型，廣泛應(yīng)用干鈉,鉀離子平衡:細(xì)胞抗鹽:各種金屬離子的吸收;重金屬毒性;各種糖類，碳源對(duì)真核生物細(xì)胞生長的影響:過氧化物，超氧化物的吸收與運(yùn)輸?shù)难芯恐小Y4741釀酒酵母為zuansuan、liangansuan、jialiuansuan、niaomiding缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將DYES2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入 BY4741 細(xì)胞內(nèi)。質(zhì)粒pYES2的篩選標(biāo)志為URA可用 SD-URA 板板進(jìn)行篩選。

操作方法:

1.取100pl冰上融化的BY4741感受態(tài)細(xì)胞，依加入預(yù)冷的目的質(zhì)1-3gCarier DNA(96℃

水浴3min,快速冰浴3min，重復(fù)一次)10pl，PEG/LiAc500ul并吸打幾次混勻，30℃水浴30min(15min 時(shí)翻轉(zhuǎn) 6-8 次混勻)。-

*備注:Carrier DNA 加入請(qǐng)?zhí)崆白冃蕴幚?95-100℃5min快速冰浴重復(fù)一次置干冰浴5min之內(nèi)使用

2.將感受態(tài)移到42℃水浴15min(7.5min 時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。

3.5000rpm離心40s棄上清，ddH400ul重懸離心30s棄上清4ddH O50ul重盤涂板29℃培養(yǎng)48-96h

注意事項(xiàng):

1.感受態(tài)細(xì)胞zuihao在冰上融化。

2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3.同時(shí)轉(zhuǎn)化 2-3 種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量

4.若使用DVES2 質(zhì)粒表達(dá)蛋白,需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖(篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖:

需要目的蛋自表達(dá)時(shí)，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源)，以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。

5.酵母為直核生物.不易長期保存。隨感受態(tài)在-800保存時(shí)間的延長，轉(zhuǎn)化效率會(huì)不斷下修建議

保存時(shí)間不超過90天

6.BY4741酵母菌株對(duì)高溫敏感zuishi生長溫度為27-30℃高于31℃生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降

7.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多,生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂

板為例:涂YPDA 平板29℃48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板29℃48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm 克降。涂 SD 雙缺平板29℃60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃ 80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。