標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠是一種可溶性的基底膜基質(zhì)膠，這種基質(zhì)是通過基因編輯技術(shù)將多種表達(dá)膠原蛋白的基因序列插入到經(jīng)永生化處理的小鼠腫胞體系中，并在實(shí)體中抽提出來的。它的主要成分是層粘連蛋白，接著是膠原蛋白IV、硫酸乙酰肝素蛋白多糖和巢蛋白?；啄せ|(zhì)也含有轉(zhuǎn)化生長因子β、表皮生長因子、類胰島素生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子和在中自然出現(xiàn)的其他生長因子。

推薦應(yīng)用

     細(xì)胞增殖或分化相關(guān)的二維或三維培養(yǎng)，以及細(xì)胞形態(tài)的研究。常用的實(shí)驗(yàn)有細(xì)胞侵襲、血管生成和類器官培養(yǎng)等。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品參數(shù)

來源：小鼠

外觀：①顏色：含酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為黃色-粉紅色，無酚紅基質(zhì)膠表現(xiàn)為半透明淡黃色； ②形態(tài)：標(biāo)準(zhǔn)型基質(zhì)膠4℃溶解后，呈透明流動液態(tài)狀態(tài)；高濃度基質(zhì)膠0℃溶解后，呈透明流動液態(tài)狀態(tài)，4℃久置呈半凝膠狀。

濃度多樣性： 蛋白濃度范圍在8~26mg/mL之間

內(nèi)毒素： ≤ 4.5EU/ mL

凝膠時(shí)間：室溫條件下5-30min凝膠，溫度22°C至37°C時(shí)成膠速度加快

2D/3D應(yīng)用非常廣泛：干細(xì)胞研究(分化、維持）、研究（侵襲）、 3D細(xì)胞培養(yǎng)（類器官、3D細(xì)胞球）、體內(nèi)植入（皮下成瘤、血管生成、栓塞）

產(chǎn)品質(zhì)量控制規(guī)范

• 通過小鼠抗體產(chǎn)物（MAP）檢測進(jìn)行常規(guī)小鼠菌落病原體篩選

• 提取自不含LDEV的小鼠細(xì)胞

• 對包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對生產(chǎn)過程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制

• 對細(xì)菌、真菌和支原體進(jìn)行檢測，確保陰性

• 使用BCA方法測定蛋白濃度

• 使用血清學(xué)方法檢測內(nèi)毒素水平

• 在37℃下進(jìn)行14天的凝膠穩(wěn)定性測試

• 每批次產(chǎn)品進(jìn)行生物學(xué)功能驗(yàn)證（類器官培養(yǎng)與分化實(shí)驗(yàn)；皮下成瘤實(shí)驗(yàn)；干細(xì)胞培養(yǎng)；血管生成實(shí)驗(yàn)等）

• 對包括LDEV在內(nèi)的多種病原體進(jìn)行廣泛的PCR檢測， 確保對生產(chǎn)過程中使用的原材料進(jìn)行嚴(yán)格控制

使用注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)環(huán)境

 • 環(huán)境溫度：20–25℃ ；環(huán)境濕度：40–60%。

 • 請穿戴個(gè)人防護(hù)裝置，注意實(shí)驗(yàn)室安全。

溫度控制  

• 基質(zhì)膠產(chǎn)品儲存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。在-20℃冰箱中儲存分裝物直到準(zhǔn)備使用。請不要儲存在無霜冰箱中。請務(wù)必保持產(chǎn)品的凍存狀態(tài)。

• 因?yàn)槟；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠在10℃以上會開始凝膠化。所以需謹(jǐn)記：?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠和所有與?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠接觸的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基都應(yīng)該預(yù)冷。在實(shí)驗(yàn)的全部過程中請務(wù)必保持?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠處于冰上。

避免污染

• 實(shí)驗(yàn)操作人員需嚴(yán)格區(qū)分實(shí)驗(yàn)操作臺、清潔區(qū)和污染區(qū)，確保插取吸頭、加樣、丟棄吸頭的動作呈單向流動。

• 實(shí)驗(yàn)后使用含 0.5% 次氯酸的消毒液對實(shí)驗(yàn)操作區(qū)消毒。

其他

• 請將基質(zhì)膠產(chǎn)品小瓶淹沒在碎冰中，并放置在4℃冰箱里過夜解凍?；锘|(zhì)膠，蛋白濃度高時(shí)可能需要更多時(shí)間。請將?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠全程保持在冰上。無論是開蓋取用產(chǎn)品或者對產(chǎn)品進(jìn)行分裝，請保持無菌操作。

• 操作過程中，需使用預(yù)冷的移液管輕柔地吹打混勻?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠以確保其均勻性。將?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠分裝到離心管中，每當(dāng)?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠堵塞吸頭和/或移液管測量不精確時(shí)請更換吸頭。如果將產(chǎn)品放置在4℃的冰上 24-48個(gè)小時(shí)，凝膠化的?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠可能會被重新水化。

操作說明

分裝操作說明

    基質(zhì)膠產(chǎn)品儲存在-20℃時(shí)是穩(wěn)定的。通過分裝并一次性使用分裝物來盡可能減少產(chǎn)品的凍融次數(shù)。以下為實(shí)驗(yàn)操作者進(jìn)行分裝操作說明。

1.將基質(zhì)膠置于預(yù)冷盒或碎冰中，放入 4℃冰箱，過夜解凍。

2.將無菌離心管、無菌槍頭等接觸基質(zhì)膠的耗材放預(yù)冷盒中或冰箱中預(yù)冷，分裝前將融化好的基質(zhì)膠表面清潔后放入預(yù)冷盒或碎冰上。

3.在潔凈工作臺中，用1mL移液槍吸取250µL基質(zhì)膠到離心管里(或根據(jù)每次用量多少進(jìn)行分裝)，標(biāo)注好信息，操作過程中盡量保持低溫，縮短操作時(shí)間。

4.分裝完成后放冰盒中，防止傾倒，并于冰箱保存。分裝后放置于-20℃冰箱中儲存?zhèn)溆谩Ｕ埐灰獌Υ嬖谧詣映谋渲袃Υ?。使用前將基質(zhì)膠插入預(yù)冷盒或碎冰中，并放置于4°C冰箱中，在冰上過夜解凍，使基底膜基質(zhì)膠在穩(wěn)定的低溫環(huán)境中緩慢充分融化。

使用方法說明

包被涂層方法   

    ?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠可以以幾種方式使用。薄層凝膠法適用于在凝膠頂部接種細(xì)胞，厚層凝膠法允許您在三維基質(zhì)內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，薄層包被法(不凝膠化)給您提供了復(fù)雜的蛋白質(zhì)層，您可以在其上培養(yǎng)細(xì)胞。您的選擇基于您想要實(shí)現(xiàn)的最終結(jié)果，無論是細(xì)胞生長、附著還是分化。

一、薄層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.將培養(yǎng)板放置在冰上，以 50 µl/cm2 向生長表面加入?；?nbsp;基底膜基質(zhì)。

3.將培養(yǎng)板放置在 37 ℃，30 分鐘。

4.如果有必要的話，請?jiān)谑褂脽o血清培養(yǎng)基輕柔漂洗前吸出未結(jié)合的材料。請確保移液器的吸頭不要刮擦包被的表面。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

二、薄層包被法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將?；?基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.使用無血清培養(yǎng)基將?；锘啄せ|(zhì)稀釋到需要的濃度。對于您的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，您應(yīng)該完成以經(jīng)驗(yàn)為主的研究來確定您的最適包被濃度。

3.向被包被的容器中加入稀釋的模基生物 基底膜基質(zhì)。加入的量應(yīng)該足以容易地覆蓋整個(gè)生長表面。在室溫下培養(yǎng) 1 個(gè)小時(shí)。

4.吸出未結(jié)合的材料并使用無血清培養(yǎng)基輕柔地漂洗。培養(yǎng)板現(xiàn)在可以使用了。

三、厚層凝膠法

1.依照推薦的方法解凍?；锘啄せ|(zhì)。使用預(yù)冷的移液管，將模基生物 基底膜基質(zhì)混合至均勻。

2.將培養(yǎng)板放置在冰上。向?；锘啄せ|(zhì)中加入細(xì)胞并使用預(yù)冷的移液管懸浮。以150-200µl/cm2 向生長表面加入?；?基底膜基質(zhì)。

3.將培養(yǎng)板放置在37℃，30分鐘?，F(xiàn)在可以添加培養(yǎng)基了。細(xì)胞也可以培養(yǎng)在這一凝膠的頂部。

細(xì)胞復(fù)蘇：

   使用細(xì)胞復(fù)蘇溶液在冰上 7 小時(shí)內(nèi)解聚?；锘啄せ|(zhì)能夠?qū)崿F(xiàn)將生長在?；锘啄せ|(zhì)上的細(xì)胞zuiyouxiao地復(fù)蘇，或者使用zhongxingdanbaimei，考慮到連續(xù)培養(yǎng)，zhongxingdanbaimei作為一種金屬酶可以分散細(xì)胞。

應(yīng)用操作說明

   以下以血管形成實(shí)驗(yàn)為例來進(jìn)行?；?strong>標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)操作說明。

1、設(shè)備、試劑及耗材

1.1設(shè)備：潔凈工作臺、移液器、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡

1.2試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基；ECM wanquan培養(yǎng)基；yimei細(xì)胞消化液、1×PBS溶液

1.3耗材：無菌槍頭；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板；無菌EP管等耗材，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)自行調(diào)整。

2、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法

2.1實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

2.1.1將基質(zhì)膠置于冰盒中，放入 4℃冰箱，使膠能過夜緩慢融化；

2.1.2 4℃預(yù)冷無菌離心管、無菌槍頭、DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基等接觸基質(zhì)膠的耗材或試劑；

2.2鋪基質(zhì)膠

2.2.1準(zhǔn)備EP管置冰上，按照下表加入各組分。

               注：大多數(shù)情況下，基質(zhì)膠：培養(yǎng)基（2:1）是適用的。

2.2.2 將上述組分按照順序混勻后，以50µL/孔加到96孔板中，重復(fù)兩孔，標(biāo)記好基質(zhì)膠信息及實(shí)驗(yàn)日期，在37℃培養(yǎng)箱中，凝固至少1小時(shí)。

2.3鋪細(xì)胞

2.3.1 取出HUVEC細(xì)胞，yimei消化。用ECM培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為每孔2×104個(gè)。

2.3.2取上述96孔板以每孔50µL加入細(xì)胞懸液。置37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)、24小時(shí)后觀察結(jié)果。