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上海飛測(cè)生物科技有限公司
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更新時(shí)間:2019-07-17 14:05:42瀏覽次數(shù):357次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線上海飛測(cè)赭曲霉毒素A免疫親和柱用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類、中藥等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時(shí)的樣品前處理。
【概要】
赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉屬和青霉屬的真菌形成的次級(jí)代謝產(chǎn)物,屬烈性的shen臟毒和gan臟毒,廣泛存在于各種食物中,谷物及其副產(chǎn)品是赭曲霉毒素A的主要來(lái)源。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明攝入了被這種毒素污染的飼料后,會(huì)發(fā)生急性或慢性中毒癥。防止污染赭曲霉毒素A的食品和飼料直接或間接地進(jìn)入人類食物鏈,加強(qiáng)對(duì)赭曲霉毒素A的檢測(cè)十分重要。
【適用范圍及性能】
用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類、中藥等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時(shí)的樣品前處理。
柱容量:≥200ng
回收率:≥90%
【試驗(yàn)原理】
本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),赭曲霉毒素A單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的赭曲霉毒素A經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和層析柱,在免疫親和柱內(nèi),赭曲霉毒素A與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。
【包裝組成】
根據(jù)不同規(guī)格,每一個(gè)盒中包含5/25支赭曲霉毒素A免疫親和層析柱及1份說(shuō)明書。
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備:
1. 高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)
2. 粉碎機(jī)
3. 200mL/50mL量筒
4. 天平:感量0.1g
5. 微量移液器:?jiǎn)蔚?100mL~1000mL
6. 槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)
7. 玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)
8. 50mL漏斗
9. 一次性玻璃試管
10. 泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)
試劑:
1. 甲醇(色譜級(jí))
2. 乙酸(分析純,色譜級(jí))
3. 蒸餾水或去離子水
4. pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS緩沖液):稱取8.0g氯化鈉,1.2g*,0.2g磷酸二氫鉀,0.2g氯hua鉀,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0,后用純水稀釋至1000mL
5. 樣品提取液:配制甲醇-水(8:2)溶液作為樣品提取液
洗脫液:配制甲醇-乙酸(99:1)溶液作為洗脫液
【試劑配制】
樣品提取液:配制甲醇-水(8:2)溶液作為樣品提取液
洗脫液:配制甲醇-乙酸(99:1)溶液作為洗脫液
【樣本處理步驟】
(一)花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)2.5)
1. 稱取20g粉碎的樣品于100mL容量瓶中,加入5.0g氯化鈉,以甲醇-水(8:2)溶液定容至100mL;
2. 轉(zhuǎn)移到均質(zhì)杯中,以均質(zhì)器高速攪拌,提取2min;
3. 4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾;
4. 取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,取過濾后液體待測(cè);
5. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;
6. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;
7. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次,流速為1-2滴/S,棄去全部流出液;
8. 再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速為1-2滴/S,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;
9. 準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。
(二)啤酒,黃酒等酒類(稀釋倍數(shù)1)
1. 取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻,用玻璃微纖維濾紙過濾,取過濾后液體待測(cè);
2. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;
3. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱,直至2mL~3mL空氣通過柱體;
4. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次,流速為1-2滴/S,棄去全部流出液;
5. 再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速為1-2滴/S,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;
6. 準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè),也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
【注意事項(xiàng)】
1. 赭曲霉毒素危害*,應(yīng)戴手套操作;
2. 不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
3. 洗脫液可以直接使用色譜級(jí)甲醇洗脫,但會(huì)降低回收率。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件:親和柱可于常溫保存,2-8℃儲(chǔ)存可延長(zhǎng)有效期,不可凍存;
保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。
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