采用課題組已構(gòu)建的攜帶人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白（rhIL-2-HSA）基因的重組畢赤酵母Pichia pastoris GS115進(jìn)行rhIL-2-HSA的分離純化研究.發(fā)酵上清液經(jīng)超濾濃縮,Blue Sepharose親和層析,Octyl Sepharose疏水層析和DEAE Sepharose離子交換層析純化獲得較高純度的目的產(chǎn)物,SDS-PAGE檢測為單一條帶.Western Blo
人白介素2（IL-2）抗原純品說明書
首先感謝您選擇深圳市優(yōu)品生物科技有限公司，我司為您提供優(yōu)質(zhì)的免疫學(xué)試劑，在您使用本產(chǎn)品前，請認(rèn)真閱讀說明書，不清楚之處，請咨詢技術(shù)人員解答，這對您順利完成實驗很有幫助。
名 稱：人白介素2（IL-2）抗原純品。
目 錄 號：YP100003
濃 度：1mg/ml
緩 沖 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300、50%甘油。
制備方法： 大腸桿菌重組蛋白。
純化方法：親和純化。
應(yīng)用范圍：用于細(xì)胞培養(yǎng)的刺激劑；用于ELISA、CLIA、WB、IHC等免疫檢測。
產(chǎn)品純度：不低于總蛋白的90%。
儲存方法：存放在-20℃。
注意事項：避免反復(fù)凍融。
有效期限：請您在管體注明有效期內(nèi)使用。
使用建議：本產(chǎn)品可以用于細(xì)胞水平、動物水平、蛋白水平的免疫學(xué)反應(yīng)相關(guān)實驗。
在本實驗室之前的研究中,利用畢赤酵母對人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白進(jìn)行表達(dá),分別將IL-2連在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物學(xué)活性,其半衰期也由IL-2單體的6.9 min延長至13.24 h.但在研究中發(fā)現(xiàn),畢赤酵母在表達(dá)HSA融合蛋白時存在蛋白降解,產(chǎn)物不均一和過度糖基化等現(xiàn)象,導(dǎo)致分離純化困難,活性下降以及半衰期縮短等問題,這些不利因素限制了畢赤酵母在表達(dá)IL-2融合蛋白中的應(yīng)用.目前中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功應(yīng)用于多種藥物蛋白的表達(dá),因此本研究將IL-2和HSA的融合蛋白在CHO細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),對篩選得到的工程細(xì)胞株的生長狀態(tài)和蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測,同時對融合蛋白的分離純化策略和生物活性進(jìn)行了分析.本研究利用基因工程技術(shù)構(gòu)建兩種不同連接方式的融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒,并通過電轉(zhuǎn)染的方法分別轉(zhuǎn)入CHO細(xì)胞中,經(jīng)過四次克隆篩選和搖瓶終篩獲得了高效表達(dá)HSA-IL-2融合蛋白的細(xì)胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表達(dá)IL-2-HSA融合蛋白的細(xì)胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.進(jìn)行Western blot檢測后發(fā)現(xiàn)兩種融合蛋白都具有HSA和IL-2雙重免疫原性,CTLL-2/MTT法檢測發(fā)現(xiàn),篩選得到的細(xì)胞株分泌表達(dá)的融合蛋白都具有一定的生物活性.對篩選得到的細(xì)胞株進(jìn)行3 L搖瓶流加培養(yǎng),CHO/p M
在本實驗室之前的研究中,利用畢赤酵母對人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白進(jìn)行表達(dá),分別將IL-2連在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物學(xué)活性,其半衰期也由IL-2單體的6.9 min延長至13.24 h.但在研究中發(fā)現(xiàn),畢赤酵母在表達(dá)HSA融合蛋白時存在蛋白降解,產(chǎn)物不均一和過度糖基化等現(xiàn)象,導(dǎo)致分離純化困難,活性下降以及半衰期縮短等問題,這些不利因素限制了畢赤酵母在表達(dá)IL-2融合蛋白中的應(yīng)用.目前中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功應(yīng)用于多種藥物蛋白的表達(dá),因此本研究將IL-2和HSA的融合蛋白在CHO細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),對篩選得到的工程細(xì)胞株的生長狀態(tài)和蛋白表達(dá)進(jìn)行了檢測,同時對融合蛋白的分離純化策略和生物活性進(jìn)行了分析.本研究利用基因工程技術(shù)構(gòu)建兩種不同連接方式的融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒,并通過電轉(zhuǎn)染的方法分別轉(zhuǎn)入CHO細(xì)胞中,經(jīng)過四次克隆篩選和搖瓶終篩獲得了高效表達(dá)HSA-IL-2融合蛋白的細(xì)胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表達(dá)IL-2-HSA融合蛋白的細(xì)胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.進(jìn)行Western blot檢測后發(fā)現(xiàn)兩種融合蛋白都具有HSA和IL-2雙重免疫原性,CTLL-2/MTT法檢測發(fā)現(xiàn),篩選得到的細(xì)胞株分泌表達(dá)的融合蛋白都具有一定的生物活性.對篩選得到的細(xì)胞株進(jìn)行3 L搖瓶流加培養(yǎng),CHO/p M
