材料與方法

1、材料

運(yùn)黑161、GABA標(biāo)準(zhǔn)品

2、儀器與設(shè)備

高速離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、真空冷凍干燥機(jī)、上海元析UV-9000S紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

實(shí)驗(yàn)部分

1、黑小麥芽的制備

挑選籽粒飽滿(mǎn)、無(wú)蛀蟲(chóng)、無(wú)霉?fàn)€的“運(yùn)黑161"，分別稱(chēng)取25.0±0.01g該黑小麥種子于100ml燒杯中。用自制微酸性電解水（pH5.55、有效氯濃度22.4mg/L）對(duì)種子浸泡消毒1h。用相應(yīng)培養(yǎng)液以料液比1:2對(duì)種子浸泡8h，將浸泡后的種子均勻平鋪在底部有孔的發(fā)芽盒中，于恒溫箱（20℃）進(jìn)行避光培養(yǎng)。培養(yǎng)期間每天用相應(yīng)培養(yǎng)液淋澆3次，對(duì)照組用等量去離子水淋澆，培養(yǎng)5天后進(jìn)行采收。

2、培養(yǎng)液成分對(duì)黑小麥芽GABA含量的影響

2.1培養(yǎng)液制備

配置質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL谷氨suan鈉溶液，濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L氯化鈣溶液，濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L磷酸吡哆醛溶液，濃度分別為5、50、100、150、200、250mmol/L氯化鈉溶液。采收后的黑小麥芽速凍后于真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行凍干，磨成粉狀后于4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/span>

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

配置不同濃度的GABA標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取1ml，分別加入0.60ml 0.20mol/L硼酸鹽緩沖液，搖勻后加入2mL5%苯fen溶液，搖勻，加入1mL7%次氯酸鈉溶液混勻，用沸水加熱5min，直到溶液變?yōu)樗{(lán)綠色，將其放入碎冰中冷卻至室溫。用紫外分光光度計(jì)在645nm處測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3樣品GABA含量的測(cè)定

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.50g黑小麥芽粉樣品，加5mL蒸餾水，在往復(fù)振蕩器震蕩提取4h，上層清液于10000r/min離心3min。用移液槍取1mL上層清液于10mL容量瓶中，按測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品的方法在光度計(jì)波長(zhǎng)645nm處測(cè)定樣品中GABA含量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、谷氨suan鈉濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

圖1 谷氨suan鈉濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

2、氯化鈣濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

圖2 氯化鈣濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

3、磷酸吡哆醛濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

圖3 磷酸吡哆醛濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

4、氯化鈉濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

圖4 氯化鈉濃度對(duì)發(fā)芽黑小麥GABA含量的影響

結(jié)論

試驗(yàn)以“運(yùn)黑161"為原料，經(jīng)微酸性電解水浸泡處理，將谷氨suan鈉、磷酸吡哆醛、氯化鈣、氯化鈉溶液作為發(fā)芽黑小麥富集GABA培養(yǎng)液。用分光光度法測(cè)得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，增加底物濃度，激發(fā)谷氨suan脫羧酶活力，使黑小麥發(fā)芽處于鹽脅迫環(huán)境等方法提高黑小麥芽GABA含量。