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真核基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)

一、服務(wù)介紹

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。目前，將外源物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的方法主要分為三大類：1、脂質(zhì)體（或是脂質(zhì)體替代物）轉(zhuǎn)染；2、電轉(zhuǎn)；3、病毒感染。轉(zhuǎn)染技術(shù)又可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

基因的功能研究可分為loss-of-function和gain-of-function，即通過過表達(dá)該基因和抑制內(nèi)源基因的表達(dá)的手段來研究某個(gè)基因的生物學(xué)功能。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（轉(zhuǎn)染）。

真核基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

服務(wù)介紹

通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰?xì)胞，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)左右，靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（短時(shí)間即可進(jìn)行觀察，但效應(yīng)會(huì)很快丟失）

服務(wù)流程

1、接收質(zhì)粒、細(xì)胞

2、細(xì)胞培養(yǎng)

3、轉(zhuǎn)染

4、拍照

5、效率鑒定

客戶提供：

1、構(gòu)建好的外源基因載體，或由本公司進(jìn)行載體構(gòu)建（需提供目的基因名稱、種屬、序列或Gene Accession Number）。

2、待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1×10⁶個(gè)細(xì)胞，可傳代，倍增時(shí)間小于48小時(shí)）以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明。

3、若需要檢測(cè)靶基因的表達(dá)，需提供相應(yīng)抗體或由公司代購(gòu)。

交付內(nèi)容

1、構(gòu)建好的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

2、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建

服務(wù)介紹

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，就是轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因及蛋白。需要在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選或者應(yīng)用高轉(zhuǎn)染效率的病毒，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行細(xì)胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞系。

服務(wù)流程

1、接收質(zhì)粒、細(xì)胞

2、細(xì)胞培養(yǎng)

3、轉(zhuǎn)染

4、抗生素篩選

5、得到單克隆細(xì)胞株

6、擴(kuò)增

7、檢測(cè)

客戶提供

1、構(gòu)建好的外源基因載體，或選擇由公司構(gòu)建（價(jià)格參考載體構(gòu)建）。

2、待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1×106個(gè)細(xì)胞，可傳代，倍增時(shí)間小于48小時(shí)）以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說明。

3、提供相應(yīng)抗體

交付內(nèi)容

1、構(gòu)建好的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。

2、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：詳細(xì)步驟、相關(guān)的外源基因表達(dá)分析等。

二、服務(wù)列表

項(xiàng)目
 備注
 周期
 
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 10個(gè)工作日
 
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染+鑒定
 鑒定方法為western blot
 45個(gè)工作日(貼壁細(xì)胞)