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伊萊博生物科技（上海）有限公司
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上海市
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一、肺纖維化背景簡(jiǎn)介
肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF)是肺組織異常修復(fù)造成不可逆損傷的一類疾病，以炎癥和細(xì)胞外基質(zhì)沉積為特征，呈進(jìn)展性和致死性的彌漫性肺間質(zhì)疾病，其中，特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)發(fā)病率。
二、肺纖維化大鼠模型構(gòu)建簡(jiǎn)介
構(gòu)建一個(gè)理想的肺纖維化模型，不僅有助于進(jìn)一步篩選肺纖維化生物標(biāo)志物，同時(shí)也為深入研究肺纖維化發(fā)病機(jī)制及動(dòng)物臨床治療肺纖維化和研發(fā)新藥提供科學(xué)基礎(chǔ)。
三、肺纖維化大鼠模型構(gòu)建方法
1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
大鼠
2. 實(shí)驗(yàn)材料
blms，注射器
3. blms誘導(dǎo)模型制備流程
（1）小鼠按照麻醉劑劑量麻醉后固定，呈仰臥位姿勢(shì)，氣管居中，暴露頸部，剪毛備皮，無(wú)水乙醇消毒后沿頸部中線開(kāi)口（開(kāi)口大小：0.5-1cm左右）緩慢鈍性分離至氣管，此時(shí)需要輕柔操作，減少因手術(shù)操作造成的氣管損傷。
（2）使用注射器（1ml或者微量注射器，胰島素針不失為好的選擇），針頭幾乎平行于氣管平面，經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端插入氣管內(nèi)，回抽無(wú)阻力，則注入少量的blms溶液（不超過(guò)0.2 ml/只，肺內(nèi)大量積液會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物的死亡）。
（3）注射完畢后，縫合傷口，后將動(dòng)物直立1-3 min，適度左右轉(zhuǎn)動(dòng)，并輕輕按摩小鼠胸部，保證blms在肺內(nèi)均勻分布，動(dòng)物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)。（3天左右即可出現(xiàn)損傷，體重降低等癥狀）28d后收集樣本。
特發(fā)性：
1. 選用SD大鼠或C57小鼠，通過(guò)blms（5mg/kg）或者脂多糖（5mg/kg）氣管內(nèi)給藥，建立特發(fā)性肺纖維化模型。
2. 麻醉動(dòng)物，仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。
3. 頸部去毛后碘伏消毒，切開(kāi)皮膚，逐層暴露氣管。
4. 將微量注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，回抽無(wú)阻力后，注入LPS溶液或者BLM溶液。
5. 手術(shù)完畢后迅速將動(dòng)物直立、旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布均勻。
6. 動(dòng)物清醒后常規(guī)飼養(yǎng)，注意術(shù)后護(hù)理，成模周期一般在6個(gè)月左右
4.模型鑒定
4.1 HE染色觀察肺組織肺泡炎程度
肺組織肺泡炎評(píng)分：無(wú)肺泡炎計(jì)1 分，輕、中、重度肺泡炎分別計(jì)2、3、4 分。輕度肺泡炎主要表現(xiàn)為單核細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增寬但結(jié)構(gòu)正常，浸潤(rùn)局限于近胸膜部，受累面積小于全肺的20 %；中度肺泡炎受累面積占全肺20 % ~ 50 %；重度肺泡炎受累面積占全肺的50 % 以上，偶見(jiàn)肺泡腔內(nèi)有單核細(xì)胞及出血造成實(shí)變。
4.2 Masson染色觀察肺組織肺纖維化程度
肺纖維化程度評(píng)分：無(wú)纖維化計(jì)1 分，輕、中、重度肺纖維分別計(jì)2、3、4 分。輕度纖維化主要累及胸膜及胸膜下肺間質(zhì)，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，受累面積小于20 %；中度纖維化受累面積占全肺的20 %~50 %；重度纖維化受累面積占全肺的50 % 以上，肺實(shí)質(zhì)紊亂，并有融合，可見(jiàn)大小不等的囊氣腔。
四、小結(jié)
在PE動(dòng)物模型中，BLM造模可行性好，研究性強(qiáng)，能夠重視一般PE，其用于IPE發(fā)病機(jī)制的研究和有效治療藥物的研發(fā)具有很大的實(shí)用價(jià)值。但是BPF動(dòng)物模型與臨床IPE相比仍存有一定差異，在實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用方面也有一定局限性，因此需加強(qiáng)對(duì)BLM作用機(jī)制及IPE的研究，進(jìn)一步明確其相關(guān)性。
五、參考文獻(xiàn)
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