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廣州潔特生物過(guò)濾股份有限公司
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更新時(shí)間：2022-09-07 12:59:35瀏覽次數(shù)：113次
聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線蛋白A可與多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端特異性結(jié)合。使用的rec-Protein A是通過(guò)基因工程-重組蛋白的方法表達(dá)獲得。由于重組表達(dá)的rec-Protein A去除了除Fc端以外的其他非特異性結(jié)合位點(diǎn)，特異性更好。本產(chǎn)品采用“高配基、高濃度、小體積"的創(chuàng)新偶聯(lián)技術(shù)，將填料中有限的羥基(-OH)結(jié)合位點(diǎn)充分活化，使得單位體積中結(jié)合更多蛋白A，最終純化效率較普通偶聯(lián)有30%的提高。蛋白A偶聯(lián)填料可直接......
l 產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)
rec-Protein A/Sepharose 比值：2.8~3.5mg rec-Protein A/ml Sepharose
rec-Protein A分子量：34.85 KDa
每分子rec-Protein A可結(jié)合IgG位點(diǎn)數(shù)：4個(gè)
rec-Protein A可結(jié)合白蛋白位點(diǎn)數(shù)：無(wú)
線性流速：300-500 cm/h
耐壓指數(shù)：≤0.3 MPa（填料）
l 注意事項(xiàng)
請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)前仔細(xì)閱讀本rProtein A預(yù)裝柱使用說(shuō)明。同時(shí)，將所要的所有試劑、耗材拿出置于室溫，恢復(fù)至室溫使用。
l 產(chǎn)品保存
產(chǎn)品儲(chǔ)存于2-8℃，保質(zhì)期兩年。
l rec-Protein A預(yù)裝柱純化IgG抗體步驟
以下實(shí)驗(yàn)方法適用于從血清或腹水中純化IgG抗體，不同來(lái)源的IgG與rec-Protein A的結(jié)合能力不同，具體情況請(qǐng)參考表1。
1. 將血清或腹水樣品（推薦上樣量2 mL樣品/mL柱）裝入截留分子量3.5 KDa透析帶中，于4 ℃冰箱中對(duì)1× PBS（pH 7.4）透析過(guò)夜；
2. 將rec-Protein A-Sepharose裝柱固定好，用10倍柱體積1× PBS（pH 7.4）平衡層析柱，建議流速為1 mL/min；
3. 將透析好的樣品從層析柱上端加入，建議流速為1 mL/min，為了獲得更好的抗體結(jié)合效果可將流穿液再上樣，重復(fù)2遍（或?qū)悠?次性加入層析柱后置于搖床上，輕輕搖動(dòng)，結(jié)合30 min）；
4. 樣品結(jié)合后，用20倍柱體積1× PBS(pH 7.4)洗滌層析柱，建議流速為1 mL/min，勿讓層析柱滴干；
5. 洗脫IgG，向?qū)游鲋隙思尤胂疵撘海?00 mM，pH 2.7），用預(yù)先加有100 μL中和緩沖液（1M Tris，pH 9.0）的4 mL Ep管接收，2 mL /管，共收集10倍柱體積，進(jìn)行10 % SDS-PAGE電泳，確定IgG樣品所在管，回收樣品。
6. 用5倍柱體積再生緩沖液（100 mM，pH 2.0）進(jìn)行再生處理，再加入10倍柱體積ddH2O清洗層析柱。最后于層析柱中加入10倍柱體積, 20% Ethanol，4~8 ℃冰箱保存處理。
l 同類產(chǎn)品純化效果比較
美國(guó)某品牌的rProtein A Sepharose 4FF 親和層析柱對(duì)人血清進(jìn)行純化，其對(duì)人IgG的結(jié)合量約為34 mg/mL Medium。
表1 rProtein A與不同來(lái)源Ig的反應(yīng)活性情況
IgG類型 | Protein A | IgG類型 | Protein A | IgG類型 | Protein A |
人 IgG1 | ++++ | 小鼠 IgG2b | +++ | 倉(cāng)鼠 Ig | + |
人 IgG2 | ++++ | 小鼠 IgG3 | ++ | 豚鼠 Ig | ++++ |
人IgG3 | - | 小鼠 IgM | +/- | 牛 Ig | ++ |
人IgG4 | ++++ | 大鼠 IgG1 | - | 馬 | ++ |
人IgA | ++ | 大鼠 IgG2a | - | 奶牛 | ++ |
人n IgD | ++ | 大鼠 IgG2b | - | 豬 | +++ |
人IgE | ++ | 大鼠 IgG2c | + | 綿羊 | +/- |
人 IgM | ++ | 大鼠 IgM | +/- | 山羊 | - |
小鼠 IgG1 | + | 兔 Ig | ++++ | ||
小鼠 IgG2a | ++++ | 雞 Ig | - |
表2 rProtein A預(yù)裝柱系列產(chǎn)品參數(shù)
特性 | rProtein A | 特性 | rProtein A |
柱體積規(guī)格 | 1mL，5mL | 填料穩(wěn)定性 | ＞20純化周期 |
基質(zhì)組成 | 4%高交聯(lián)度瓊脂糖 | pH穩(wěn)定性 | pH 2~11 |
基質(zhì)平均粒徑 | 90μm | 推薦工作pH范圍 | pH 3~10 |
功能基團(tuán) | rProtein A：34.85kDa； IgG結(jié)合位點(diǎn)：4 | 推薦在位清洗pH范圍 | pH 2~11 |
配基密度 | ≈3mg rProtein A/mL 基質(zhì) | 工作溫度 | 4~40℃ |
結(jié)合能力 | 30-55mg人IgG/mL填料 | 運(yùn)輸條件 | 20%乙醇浸泡，室溫運(yùn)輸 |
推薦流速 | 30~150cm/mL | 貯藏條件 | 20%乙醇條件下， 4~8℃保存 |
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