詳細(xì)介紹
一、試劑盒簡介
本試劑盒為包含去除基因組DNA的高效DNase的新一代快速逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,與上一代產(chǎn)品相比具有更高的逆轉(zhuǎn)錄效率。試劑盒中主要包含4管成分:gDNA Remover中主要包括濃縮的DNase及Buffer;4× EZscript RT Mix II中主要包含了逆轉(zhuǎn)錄所需的除引物以外的所有成分(逆轉(zhuǎn)錄酶、buffer、RNase Inhibitor、dNTPs等),Oligo dT18、Random Hexamer為獨立包裝,便于添加目標(biāo)片段特異性引物(如microRNA, lncRNA, circRNA等的特異性引物)。
本試劑盒采用的DNase及Buffer反應(yīng)系統(tǒng)經(jīng)過特殊的優(yōu)化,僅需室溫(25°C)反應(yīng)5分鐘,就能降解95%以上的基因組DNA,*的降低了可能殘留的基因組對結(jié)果的干擾。
本試劑盒采用的新型M-MLV突變體逆轉(zhuǎn)錄酶具有很強(qiáng)的抗*力及擴(kuò)增能力,擴(kuò)增效率尤佳,同時采用了目前新型優(yōu)化的反應(yīng)體系,進(jìn)一步提高了逆轉(zhuǎn)錄效率。使用本試劑盒逆轉(zhuǎn)錄15分鐘得到的擴(kuò)增產(chǎn)物量可以達(dá)到AMV逆轉(zhuǎn)錄酶大約1h的產(chǎn)物量(Ct值相同)。后續(xù)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物建議用于PCR、qPCR、基因克隆等實驗。
二、產(chǎn)品組分
Components | EZB-RT2G (100 Rxns) |
4× EZscript RT Mix II | 550 μl |
Oligo dT18 | 110 μl |
Random Hexamer | 110 μl |
gDNA Remover | 220 μl |
Nuclease free ddH2O | 1 ml |
*1:包括逆轉(zhuǎn)錄酶、buffer、RNase Inhibitor、dNTP Mixture等組分。
三、保存條件
本試劑盒建議置于-20℃保存。
四、試劑盒特點
1、本試劑盒為預(yù)先混好的4× EZscript RT Mix II,只需加入模板RNA和水混勻后便可以開始反應(yīng);使用了新一代逆轉(zhuǎn)錄酶,具有更強(qiáng)的酶活性和更高的靈敏度。
2、含有去除基因組DNA的gDNA Remover,只需室溫5分鐘即可去除基因組DNA。
3、只需42℃、15分鐘即可高效合成熒光定量PCR所需的高質(zhì)量cDNA模板,是進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)的理想試劑。
4、含有Oligo(dT)18和Random Hexamer兩種反轉(zhuǎn)錄引物,可根據(jù)實際情況區(qū)別使用。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可使用Oligo(dT)18引物或者Random Hexamer引物,也可以O(shè)ligo(dT)18和Random Hexamer兩種引物同時使用。只擴(kuò)增一種目的基因時,也可以使用Specific Primer作為反轉(zhuǎn)錄引物。
五、注意事項
1、當(dāng)同時需要進(jìn)行數(shù)次反應(yīng)時,應(yīng)先配制各種試劑的混合液,然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確,減少試劑損失,避免重復(fù)分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒炛g產(chǎn)生的誤差。
2、4× RT Master Mix在使用前需Vortex振蕩混勻,輕輕離心后使用。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取。同時,要使用精確、量程適合的移液槍,并且不要使Tip插入液面過深,否則會因Tip壁粘著造成損失,而使酶量不足。
3、分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。