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體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀
2025-5-6 閱讀(19)
體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀
一、 儀器介紹
實驗目的:
本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性
應用范圍
應用于科研、農業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域
符合標準:
GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》
二、試驗流程
1)細胞培養(yǎng):
選擇合適細胞系(如L5178Y、CHO),常規(guī)傳代培養(yǎng)
2)受試物處理:
暴露于不同濃度受試物(需設陰性/陽性對照)
3)表達期:
預留足夠時間(通常7-10天)使突變表型顯現。
4.)突變體篩選:
TK試驗:使用篩選TK突變體。
HPRT試驗:選HPRT突變體。
5)克隆形成分析:
計數突變集落,計算突變頻率(突變集落數/存活細胞數)
6)數據統(tǒng)計:
與對照組比較,判斷突變率是否顯著增加。
三、注意事項
1)細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率(通常>50%)
2)代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內代謝,(如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9)。
3)假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。
4)合規(guī)性: 遵循國際指南(如OECD 490、ICH S2R1)。