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病毒滅活能力試驗懸液該怎么制備?

閱讀:2954      發(fā)布時間:2021-4-28
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  病毒滅活能力試驗是一種十分重要的試驗過程,做病毒的殺滅效果試驗檢測,首先需要根據(jù)具體的產(chǎn)品具體的病毒滅活分析,病毒滅活效果驗證,要找可靠具備CMA資質(zhì)認(rèn)證的病毒殺滅試驗檢測中心機構(gòu)。--廣東省華微檢測股份有限公司。
  病毒滅活能力試驗的病毒懸液制備方法?
  1、從液氮中取出冷凍的測試宿主細(xì)胞,在37°C的溫水中迅速融化,并使用毛細(xì)管吸管將其移植到細(xì)胞中含維護(hù)溶液的細(xì)胞管中,移液幾次以混合,立即離心(3000r/min,3min),并除去上清液。然后添加適當(dāng)?shù)募?xì)胞維持溶液,移液幾次以混合,然后如上所述離心后,轉(zhuǎn)移到含有10種培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。每天觀察細(xì)胞生長,并在單層細(xì)胞過度生長時將其用于消毒測試。
  2、取出冷凍保存的測試病毒種類,在37°C水浴中融化,用細(xì)胞維持液稀釋10倍,然后接種到已生長有單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中,將其置于37°C的培養(yǎng)箱中,使其吸附并與細(xì)胞一起生長。每天觀察病變,并在3/4個細(xì)胞病變時收獲病毒。
  3、用聲波(或反復(fù)冷凍和融化)破壞含病毒的培養(yǎng)基中的宿主細(xì)胞,并在冰浴中破壞宿主細(xì)胞以釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)以除去沉淀物(主要是細(xì)胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。每管裝1.0份等分試樣到無菌離心管(1.5)中。
  4、取病毒懸液,并根據(jù)病毒滴度確定方法確定病毒滴度。將其余的冷凍并儲存在-80℃下以備后用。
 

病毒滅活能力試驗

 

  病毒滅活能力試驗的三種原理:
  1、包膜的破壞:包膜中含有脂質(zhì),因此包膜的病毒可以被脂質(zhì)溶劑快速破壞,例如氯仿或脫氧膽酸鈉可以使它失活病毒。實際上,病毒對脂質(zhì)溶劑的敏感性可用于檢查病毒是否具有包膜。諸如滲透壓變化,凍結(jié)和解凍,熱量和干燥之類的物理因素可能會損壞外殼。一般認(rèn)為,呼吸道感染病毒對干燥的抵抗力較弱,并且傳播主要是直接的人感染,這是由于包膜引起的。
  2、病毒蛋白質(zhì)變性:可使蛋白質(zhì)變性的化學(xué)試劑可以使病毒失活,例如酚,次氯酸鹽,酸和堿等。。加熱引起的變性也是一種有效的滅活方法。一般而言,該病毒對熱的抵抗力較弱,并且在60°C的幾分鐘內(nèi),該病毒的傳染性顯著降低。因此,當(dāng)分離出病毒時,從患者身上采集的標(biāo)本需要在低溫下保存,并迅速送到實驗室,并在-80下保存以進(jìn)行長期保存。低于°C的低溫條件。
  3、病毒核酸損傷:諸如y射線之類的電離輻射會切斷核酸,紫外線會導(dǎo)致核苷酸鏈上相鄰的嘧啶堿基形成二聚體,從而破壞病毒基因的功能。另外,染料如as啶橙或中性紅可以與病毒核酸結(jié)合,暴露于光下可以分解核酸并使滅活的漿果失活。

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