豬乙型腦炎ELISA診斷試劑盒使用說明書

【用途】

豬乙型腦炎ELISA診斷試劑盒用于檢測(cè)豬血清中乙型腦炎病毒抗體。評(píng)估豬場(chǎng)乙型腦炎疫苗免疫狀況。豬乙型腦炎的流行病學(xué)調(diào)查。

【簡(jiǎn)介】

試劑盒由抗原包被的微孔板，酶標(biāo)羊抗豬IgG及其它試劑制成，應(yīng)用間接ELISA原理檢測(cè)豬血清中抗乙型腦炎病毒的抗體。

【原理】

本試劑盒是采用乙腦病毒（JEV）弱毒疫苗毒株經(jīng)純化、濃縮制成的抗原包被微孔板，在試驗(yàn)中，加入稀釋的對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有乙型腦炎病毒特異性抗體，則將與微孔板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與微孔板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液中止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。

【試劑盒主要成分】

1．  包被抗原的微孔板                     2塊                    （96孔）

2．  陰（綠蓋）、陽(yáng)（紅蓋）性對(duì)照血清    各1管                   （1ml/管）

3．  抗豬IgG-HRP結(jié)合物（黃蓋）           1瓶                   （22ml/瓶）

4．  20倍濃縮洗滌液 （白蓋）              1瓶                   （30ml/瓶）

5．  底物A（紫蓋）液、B（黃蓋）液      各1瓶                   （12ml/瓶）

6．  終止液（藍(lán)蓋）                        1瓶                   （12ml/瓶）

7．  樣品稀釋液 （透明蓋）                 1瓶                   （50ml/瓶）

【用前準(zhǔn)備】

仔細(xì)閱讀說明書，所有試劑在4℃條件下保存，禁止結(jié)冰，如果干燥袋發(fā)紅不能使用，不用的孔必須用封口膜封住以防潮濕對(duì)平板有害，不要使平板接觸強(qiáng)光和氧化物。不要使用過期的成分和混合使用成分。注意加樣和沖洗，以確保試驗(yàn)的度和準(zhǔn)確度。操作過程中注意安全，要使用手套，終止液含有氫氟酸使用要小心。所有的廢液要經(jīng)過處理和凈化。

本品為獸用產(chǎn)品。

【未提供的需用材料】

微量加樣器、加液槽、蒸餾水、恒溫箱、酶標(biāo)儀、吸水紙

【注意事項(xiàng)】

1、  試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。

2、  不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用。

3、  注意防止試劑盒各組分受污染。

4、  微孔板拆封后避免受潮或沾水（每次將剩余的微孔板用封口袋扎緊后盡快置于4℃）。

【試劑配制】

洗滌液：用蒸餾水稀釋20倍濃縮洗滌液，混勻。

【操作步驟】

1、  取預(yù)包被的微孔板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用）。用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后加入板孔中，每孔加100μl。陰、陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100μl。另設(shè)一空白對(duì)照孔，空白對(duì)照孔加100μl稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30min。

2、  甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，300μl/孔，每次靜置3分鐘倒掉，zui后一次在不掉屑干凈吸水紙上拍干。

3、  每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，置37℃溫育30min。

4、  洗滌3次, 方法同2。

5、  每孔加底物A液、B液各1滴（50μl），混勻，室溫（20-25℃）避光顯色10min。

6、  每孔加終止液1滴（50μl），10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

【結(jié)果判定】

以空白孔調(diào)零，在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于0.4，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.2。

樣品OD630值大于0.4，判為陽(yáng)性；樣品OD630值在0.2到0.4之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.2，判為陰性。

【規(guī)格】 96孔×2塊   

【有效期】6個(gè)月  

【貯存】 2-8℃避光保存   

【生產(chǎn)日期】見試劑盒外包裝

提示：酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣，酶標(biāo)板仍然正常有效，不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)放心使用