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Cy3 炔烴是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的熒光染料，各種花青3（Cy3）染料已用于標記生物分子，用于熒光成像和其他基于熒光的生化分析。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Cy3 炔烴。
實驗方案
操作方案
標記寡核苷酸
1.準備以下試劑：
200mMTHPTA [tris（3-羥丙基三唑基甲基）胺]水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴修飾的低聚水溶液（盡可能濃縮，例如>10 mg / mL）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）
2.在反應(yīng)前將CuSO4與THPTA以1：2的比例混合并充分渦旋幾分鐘。該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。
3.向炔烴改性的低聚物溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為2-5當量）。
4.加入5當量的THPTA / CuSO4工作溶液（來自步驟1）。
5.加入10-30當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應(yīng)混合物30-60分鐘。
7.沉淀或純化寡聚物。
標記肽
1.準備以下試劑：
200 mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴修飾肽水溶液或DMF溶液（取決于您的肽溶解度，如果可能，> 10 mg / mL）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）
2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。
3.向炔烴修飾的肽溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。
4.加入5-10當量的THPTA / CuSO4。
5.加入10-20當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應(yīng)混合物30-60分鐘。
7.通過HPLC純化您想要的肽。
標記炔烴有機小分子
1.準備以下試劑：
200 mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴化合物水溶液或DMF溶液（取決于您的化合物溶解度，如果可能，> 10mg / mL，）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）。
2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。當冷凍時，該溶液可穩(wěn)定數(shù)周。
3.向炔烴溶液中加入過量的染料疊氮化物（摩爾比為5-10當量）。
4.加入25當量的THPTA / CuSO4。
5.加入50當量的抗壞血酸鈉。
6.在室溫下攪拌反應(yīng)混合物30-60分鐘。
7.通過色譜或其他方法純化您想要的分子。
標記生物聚合物
1.準備以下試劑：
200 mM THPTA配體水溶液
100mM CuSO4水溶液
炔烴改性的水中生物聚合物（盡可能濃縮，例如> 5毫克/毫升）
100 mM抗壞血酸鈉水溶液
10 mM染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（有關(guān)推薦的溶劑，請參閱我們的網(wǎng)站）。
2.在反應(yīng)前幾分鐘以1：2的比例孵育CuSO4與THPTA配體。 該溶液在冷凍時可穩(wěn)定數(shù)周。
3.向炔烴改性的生物聚合物溶液中加入過量的染料疊氮化物（負載比：5-20染料疊氮化物/炔烴）。
4.加入5摩爾當量（參考染料疊氮化物）的THPTA / CuSO4。
5.加入10當量的抗壞血酸鈉（參見染料疊氮化物）。
6.在室溫下攪拌，渦旋或搖動反應(yīng)混合物30-60分鐘。
7.通過凝膠過濾或透析純化您想要的分子。
標記細胞，細胞裂解物或生物樣品
1.準備以下試劑：
100mM THPTA配體水溶液
20mM CuSO4水溶液
300mM抗壞血酸鈉水溶液
2.5mM炔烴或疊氮化物標記試劑水溶液或DMSO溶液
2.對于每個疊氮化物或炔烴修飾的細胞或細胞裂解物樣品，將以下試劑加入1.5 mL微量離心管中，然后短暫渦旋混合。
50μL細胞或細胞裂解液樣品
50μLPBS緩沖液
50μL5mM相應(yīng)的染料疊氮化物水溶液或DMSO溶液（或染料炔烴）檢測試劑
3.加入10μL100mM THPTA溶液，短暫渦旋混合。
4.加入10μL20mM CuSO4溶液，短暫渦旋振蕩。
5.加入10μL300mM抗壞血酸鈉溶液以引發(fā)點擊反應(yīng)，短暫渦旋混合。
6.保護點擊反應(yīng)不受光照，使其在室溫下孵育30分鐘。
7.點擊標記細胞或細胞裂解物并準備用于下游處理和分析。
圖1所示?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)青藍3炔(相當于Cy3®炔]
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