FITC-xtra 異硫氰酸熒光素具有與FITC幾乎相同光譜特性，溫和綴合條件下比FITC的綴合產率高。在相同條件下，FITC-xtra抗體綴合物提供比FITC標記的綴合物的信號/背景比高得多。
圖1.將HeLa細胞與帶有(Tubulin+)或不帶有(Tubulin-)的小鼠抗微管蛋白抗體以及山羊抗小鼠IgG孵育，然后分別用FITC-Xtra鏈霉親和素偶聯物(綠色，左)或FITC-鏈霉親和素偶聯物(綠色，右)染色。細胞核用Hoechst 33342(藍色，Cat#17530)染色。
FITC-xtra 異硫氰酸熒光素適用范圍
用于標記蛋白質
FITC-xtra 異硫氰酸熒光素優(yōu)勢
1.光穩(wěn)定性好
2.熒光不受pH(4-10)影響
FITC-xtra 異硫氰酸熒光素實驗方案
（該標記方案適用山羊抗小鼠IgG與FITC-xtra的偶聯物）
準備蛋白質儲備溶液（溶液A）
將100μL反應緩沖液(例如，1M碳酸鈉溶液或pH~9.0的1M磷酸鹽緩沖液，)與900μL目標蛋白溶液(例如抗體，蛋白質濃度> 2 mg / ml)混合，得到1 mL蛋白標記儲備液。
準備染料儲備溶液（溶液B）
將無水DMSO加入到FITC-xtra小瓶中以制備10-20mM儲備溶液，通過移液或渦旋混合均勻。
注：在開始綴合之前準備染料儲備溶液(溶液B)隨配隨用，保證使用的溶液的新鮮。染料儲備溶液的長期儲存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮濕的情況下儲存在冰箱中兩周。
準備所需的蛋白質綴合物
注：每種蛋白質都需要不同的染料/蛋白質比例，這也取決于染料的性質。蛋白質的過度標記可能對其結合親和力產生不利影響，而低染料/蛋白質比率的蛋白質綴合物會降低靈敏度。我們建議您通過使用連續(xù)不同量的標記染料溶液重復步驟4和5來實驗確定染料/蛋白質比率。通常，對于大多數染料 - 蛋白質綴合物，推薦使用4-6種染料/蛋白質。
1.使用10：1摩爾比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白質)作為起始點：將5μl染料儲備溶液(溶液B，假設染料儲備溶液為10 mM)加入到蛋白質的小瓶中溶液(95μl溶液A)，有效搖動。假設蛋白質濃度為10mg / mL并且蛋白質的分子量為~200KD，蛋白質的濃度為~0.05mM。
注意：蛋白質溶液中DMSO的濃度應<10%。
2.進行綴合反應。在有效搖動下將適量的染料儲備溶液(溶液B)加入到蛋白質溶液(溶液A)的小瓶中。繼續(xù)在室溫下旋轉或搖動反應混合物30-60分鐘。
3.重復#3.2，溶液B /溶液A的摩爾比為5：1; 如果需要，分別為15：1和20：1。
4.使用預制的旋轉柱或其他技術純化所需的綴合物。
5.計算上述4種綴合物的染料/蛋白質比(DOS)。
