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Amplite 熒光法堿性磷s酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的用于磷酸酶的試劑盒，堿性磷酸酶是廣泛分布于人體各臟器器官中，其中以肝臟為多其次為腎臟，骨骼、腸、和胎盤等組織,。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團(tuán)，從而使DNA 或RN段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端，并生成一分子的有機(jī)基團(tuán)和一分子的無機(jī)磷酸。堿性磷酸酶不是單一的酶，而是一組同功酶。堿性磷酸酶在ELISA、免疫組化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的靈敏度。它廣泛地用于多種生物學(xué)分析（特別是免疫分析）和基于ELISA的疾病診斷。用MUP，一種堿性磷酸酶的藍(lán)色熒光底物來定量檢測溶液中、細(xì)胞抽提液，固相物質(zhì)表面（例如PVDF膜）的堿性磷酸酶活性。本試劑盒提供所有必須成分，包括我們的產(chǎn)品組合和分析方法，并且與可用于HTS（高通量篩選）。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Amplite 熒光法堿性磷s酶檢測試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備堿性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品和/或測試樣品（50μL）
3.在室溫或37°C孵育10 - 30分鐘
4.監(jiān)測Ex / Em = 360/450 nm處的熒光強(qiáng)度（截止= 435 nm）

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 MUP Plus 原液（250X）：
將100μL無菌H2O加入到MUP Plus （組分A）的小瓶中，制成250X MUP Plus 原液。應(yīng)立即使用MUP Plus 原液。

1.2 堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mU / mL）：
加入100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸餾水至堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分C，10單位），得到100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)
將10μL100單位/ mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1,000 mU / mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，在H2O-0.1％BSA中進(jìn)行1:10，得到100 mU / mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7）。然后取100 mU / mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)品（AS6-AS1）。注意：應(yīng)丟棄未使用部分稀釋的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.工作溶液

將20μL250XMUP Plus 儲備溶液加入5 mL分析緩沖液（組分B）中，制成堿性磷酸酶工作溶液。注意：避光。為每個(gè)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備新鮮的堿性磷酸酶工作溶液。