樣品實(shí)驗方案

簡要概述

1.在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2.用OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器染色細(xì)胞
3.用測試化合物處理細(xì)胞
4.使用流式細(xì)胞儀Pacific Blue Channel監(jiān)測熒光強(qiáng)度（Ex / Em = 405/450 nm）

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器原液：
將100μLDMSO（組分B）加入到OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器（組分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：1μL重組的OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器原液足以容納0.5 mL細(xì)胞。 應(yīng)立即使用原液,避光。

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樣品分析

1.用OxiVision 藍(lán)色過氧化物傳感器儲備液在培養(yǎng)基或37°C所需緩沖液中染色細(xì)胞20-30分鐘，避光。

2.用測試化合物在培養(yǎng)基或37℃的所需緩沖液中處理細(xì)胞一段所需的時間。對于對照樣品（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。注意：建議在培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。然而，如果測試的化合物對血清敏感，則可以在前吸出生長培養(yǎng)基和血清因子。在抽吸后，將細(xì)胞重懸于1X Hank鹽溶液和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液中?；蛘撸梢栽跓o血清培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。注意：我們用培養(yǎng)基中的100μM過氧化氫在37°C處理Jurkat細(xì)胞90分鐘以誘導(dǎo)過氧化氫。詳細(xì)信息請參見圖1。

3.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測太平洋藍(lán)色通道（Ex / Em = 405 / 450nm）的熒光強(qiáng)度。