樣品實驗方案

簡要概述

1.準備D-乳酸脫氫酶工作溶液（50 µL）
2.加入D-乳酸脫氫酶標準品或測試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘-2小時
4.監(jiān)測在A575nm / A605nm處的吸光度比增加

溶液制備

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環(huán)。
1.1 NAD儲備溶液（100X）：
將100 µL H2O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲備溶液。

1.2 D-LDH標準溶液（100 U / mL）：
將100 µL H2O或1x PBS緩沖液加到D-LDH標準溶液（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL D-LDH標準溶液。

2.標準溶液

D-LDH標準
將10 µL 100X D-LDH標準溶液加到990 µL 1x PBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL D-LDH標準溶液。 取1000 mU / mL D-LDH標準溶液，并在PBS中進行1：3的系列稀釋，以得到D-LDH標準品（SD7-SD1）的系列稀釋液。 注意：稀釋的D-LDH標準溶液不穩(wěn)定，應在4小時內使用。

3.工作溶液

3.1 將10 mL測定緩沖液（組分B）添加到瓶中的酶探針（組分A）中，制成酶探針混合物。 注意：此酶探針混合物足以容納兩個96孔板。 它在室溫下不穩(wěn)定，應在2小時內及時使用，并避免暴露在光線下。 或者，可以通過將200 µL H2O加入組分A的瓶子中制成50倍的D-LDH酶混合儲備液，然后通過將儲備液與測定緩沖液（組分B）混合并制備D-LDH工作溶液。 按比例的100倍NAD解決方案。

3.2 將50 µL 100X NAD儲備溶液添加到5 mL酶探針混合物中，并充分混合以制成D-LDH工作溶液。 注意：此D-LDH工作溶液足以用于一個96孔板。 它不穩(wěn)定-足以進行一個實驗并立即使用。